[发明专利]一种快速鉴定荣昌猪肉的方法和试剂盒在审
| 申请号： | 202110241217.1 | 申请日： | 2021-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN113151491A | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 布丽君;李星;解华东;李睿;巍薇;张晓春;景绍红;梅学华;李睿;欧秀琼 | 申请（专利权）人： | 重庆市畜牧科学院;布丽君 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 董林利 |
| 地址： | 402460 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴定 荣昌 猪肉 方法 试剂盒 | ||
1.一种快速鉴定荣昌猪肉的方法，其特征在于，所述方法为通过基因扩增技术检测荣昌猪肉miRNA-182基因上的高频G/A突变，所述荣昌猪肉miRNA-182基因序列为SEQ IDNO.1。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因扩增技术为竞争PCR扩增。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述竞争PCR扩增所用引物包括1条通用上游引物和2条竞争性下游引物。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述竞争PCR扩增的产物为两条大小不同的片段。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的通用上游引物核苷酸序列为SEQ IDNO.2，所述竞争性下游引物中内侧引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3，外侧引物核苷酸序列为SEQ ID NO.4。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述竞争PCR扩增包括如下步骤：
1)制备待检样本的DNA样本作为扩增模板；
2)利用权利要求5中所述的引物进行竞争PCR扩增；
3)在PCR反应完毕后直接进行琼脂糖凝胶电泳检测，产物片段为182bp和295bp的是荣昌猪肉，仅有295bp片段的是普通猪肉，没有任何阳性产物条带的是非猪肉样品。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述竞争PCR扩增体系为：ddH2O 16.375μl，通用上游引物1μl，下游内侧引物1.5μl，下游外侧引物0.5μl，10×Taq Buffer 2.5μl，dNTPMix(5U/μL)2μl，Takarar Taq(5U/μL)0.125μl，扩增模板1μl，共25μl。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述竞争PCR反应条件为：94℃，预变性5min；94℃45s，58℃45s，72℃1min，共33个循环；最后72℃延伸10min。
9.一种快速鉴定荣昌猪肉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求5中所述的通用上游引物和竞争性下游引物。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTP、连接酶及相应的缓冲液。
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