[发明专利]一种鉴定Junior血型基因分型的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种鉴定Junior血型基因分型的试剂盒和方法，属于血型基因分型技术领域。其中，所述试剂盒包括分别具有SEQ ID No.1~SEQ ID No.30所示核苷酸序列的引物，进一步还可包括分别具有SEQ ID No.31~SEQ ID No.34所示核苷酸序列的引物。利用本发明，不仅可以鉴定Junior血型的基因分型，还能鉴定Jr(a‑)稀有血型，方便、快速、准确，为临床Junior血型鉴定、Jr(a‑)稀有血型筛查等应用提供技术支持。

技术领域

本发明属于血型基因分型领域，具体地，涉及一种鉴定Junior血型基因分型的试剂盒和方法。

背景技术

Junior血型系统，发现于1970年，被国际输血协会(International Society ofBlood Transfusion，ISBT)编号为ISBT 032。该血型系统目前仅发现唯一一个血型抗原，即Jra抗原，由ABCG2基因(GeneBank Accession Number:NG_032067.2)编码，该基因位于4号染色体，有16个外显子，转录起始位点位于2号外显子。据ISBT统计，Jra抗原为红细胞高频抗原，在超过99.9％的人类红细胞上均有表达，尤其是在欧洲与北美人群中该抗原阴性的Jr(a-)血型极为罕见；但是，在日本等亚洲人群中Jr(a-)血型的出现频率约为0.05％-1.7％，该血型为稀有血型，具有明显的地域性分布特征。

根据2020年4月瑞金医院领衔的ChinaMAP(中国代谢解析计划)联盟在《CellResearch》杂志报道的迄今为止最大规模的中国人基因库研究结果表明，中国人的遗传特征与欧洲、非洲、南亚和拉丁美洲人群之间存在着巨大差异，与非洲人群差距最大，而与东亚尤其是日本人群非常相似，其中中国汉族人群与日本人群聚类极为接近，甚至中国北方汉族人群与日本人群的聚类完全重叠。虽无相关研究报道，但是据此可推测，中国汉族人群中Jr(a-)稀有血型的出现频率也应接近0.05％-1.7％，这一频率接近目前临床输血中除ABO之外最为关注的RhD-(俗称“熊猫血”，出现频率0.3％)血型。其中，亚洲人群中最为常见的Jr(a-)等位基因型为ABCG2*01N.01:c.376CT(p.Gln126X)。

作为极具免疫原性的血型抗原，Junior血型不合会引发溶血性输血反应和新生儿溶血病，严重时会危及患者生命。因此，日本红十字血液中心在对献血者血型鉴定时，常规检测Junior血型。但是，在我国，由于Jra抗原血清学检测与基因分型均无商品化试剂，也无相关技术方法建立，临床输血中无法对供血者与患者进行Junior血型检测，具有极大的安全隐患。因此，建立Junior血型的鉴定技术，对于保证临床输血安全至关重要。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明旨在基于Junior血型抗原编码基因ABCG2的序列特征，创建一种ABCG2基因编码区测序的方法；同时，基于Jr(a-)血型在亚洲人群中最常见的等位基因型ABCG2*01N.01(c.376CT(p.Gln126X))，创建一种PCR-SSP快速鉴定Jr(a-)稀有血型的方法，以应用于临床Junior血型鉴定、Jr(a-)稀有血型筛查等应用研究领域。

为实现上述目的，

本发明第一方面提供一种鉴定Junior血型基因分型的试剂盒，包括分别具有SEQID No.1～SEQ ID No.30所示核苷酸序列的引物。其中SEQ ID No.为奇数表示正向引物，SEQ ID No.为偶数表示反向引物。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包括用于鉴定Jr血型的引物对。在本发明的一些具体实施方案中，所述用于鉴定Jr血型的引物对分别具有SEQ ID No.31和SEQID No.32所示核苷酸序列的引物。进一步地，所述试剂盒还包括用于扩增内参基因的引物对。更进一步地，所述内参基因为ABCG2基因(NG_032067.2)。在本发明的一些具体实施方案中，所述用于扩增内参基因的引物对分别具有SEQ ID No.33和SEQ ID No.34所示核苷酸序列。