[发明专利]一种鉴别甲状腺结节良恶性的组合物、试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种鉴别甲状腺结节良恶性的组合物，其特征在于，所述组合物包括：

hsa-miR-146b-3p逆转录茎环引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACCAGA（SEQ ID NO.1）；

hsa-miR-146b-3p检测正向引物：

CCTGTGGACTCAGTTCTG（SEQ ID NO.2）；

通用反向引物：

ATCCAGTGCAGGGTCCGAGG（SEQ ID NO.3）；

内参基因U68逆转录茎环引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAGTTGTGG（SEQ ID NO.4）；

内参基因U68检测正向引物：

AGAGGTGCAAACAGCAAGC（SEQ ID NO.5）。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括阳性质控品和阴性质控品。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，阳性质控品为人工合成单链hsa-miR-146b-3p mimics：GCCCUGUGGACUCAGUUCUGGU（SEQ ID NO.6）和人工合成内参基因U68的RNAmimics：AUUGCACCUAAACCCAAGAAUCACUGUUUCUUAUAGCGGUGGUUUAAACAGAGGUGCAAACAGCAAGCGGAUCUUGUCGCCUUUGGGGGGCUGUGGCCGUGCCCCUCAAAGUGAAUUUGGAGGUUCCACAACU（SEQ ID NO.7）的混合物；阴性质控品为人工合成单链cel-mir-39-3p mimics：UAUACCGAGAGCCCAGCUGAUUUCGUCUUGGUAAUAAGCUCGUCAUUGAGAUUAUCACCGGGUGUAAAUCAGCUUGGCUCUGGUGUC（SEQ IDNO.8）。

4.如权利要求1~3所述的组合物在制备鉴别甲状腺结节良恶性的试剂盒中的用途，其特征在于，使用方法包括如下步骤：

（1）使用提取试剂盒从新鲜手术组织和/或穿刺组织样本中提取microRNA；

（2）以步骤（1）提取的microRNA为模板，用hsa-miR-146b-3p逆转录茎环引物和内参基因U68逆转录茎环引物为引物逆转录制备cDNA；

（3）将制备好的cDNA进行定量PCR检测；

（4）检测结果判定。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，检测结果判定包括如下步骤：

（1）判定检测体系是否合格：阳性质控品中hsa-miR-146b-3p和内参基因U68的检测Ct值均≤30，阴性质控品中hsa-miR-146b-3p和内参基因U68无检测信号或检测Ct值均40，则判定检测体系合格；

（2）判定样本是否合格：样本内参基因U68检测Ct值≤30，则判定样本合格；

（3）若hsa-miR-146b-3p检测Ct值-内参基因U68检测Ct值≤临界值，则判定该样本hsa-miR-146b-3p表达量增加，临床提示该样本可能为甲状腺癌的概率增加；

（4）若hsa-miR-146b-3p检测Ct值-内参基因U68检测Ct值临界值，则判定该样本hsa-miR-146b-3p表达量降低，临床提示该样本可能为甲状腺癌的概率降低。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述临界值为8.86。

7.一种鉴别甲状腺结节良恶性的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1~3中任一项所述的组合物。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括以下microRNA逆转录反应所需试剂：RNA逆转录酶、5×缓冲液、0.1M DTT、dNTPs、RNA酶抑制剂。