[发明专利]一种环状RNA hsa_circ_0059707及其特异性扩增引物和应用

说明书

本发明涉及一种环状RNA hsa_circ_0059707及其特异性扩增引物，所述环状RNA对应的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明的环状RNA在急性髓系白血病患者的骨髓单个核细胞中低表达，因此可以作为筛查急性髓系白血病的分子标志物。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种用于急性髓系白血病诊断的环状RNA。

背景技术

急性髓系白血病(AML)是起源于髓系祖细胞的一类造血系统恶性克隆性疾病，在骨髓等造血组织中白血病细胞大量增殖，使正常造血受抑制，是血液系统恶性肿瘤最常见的类型。其发病涉及细胞分化、增殖、凋亡等多方面的异常改变，非随机性染色体异常、癌基因和抑癌基因突变等在AML的发生发展过程中起着重要作用，近年的研究表明在该过程中表观遗传学改变也发挥重要作用。尽管多种药物联合化疗和造血干细胞移植等治疗手段已有巨大的突破，急性髓系白血病的复发和转移仍频繁地发生，成为晚期急性髓系白血病患者死亡的主要原因。早期诊断、早期治疗能够大大减少急性髓系白血病恶化的进一步发生，随着分子水平的发展以及对急性髓系白血病发生、发展、治疗相关机制的进一步研究，对靶向诊断和靶向治疗分子标志物的筛选和研究成为急性髓系白血病研究最受关注的领域之一。

环状RNA(Circular RNA，circRNA)是一类共价闭合的环状RNA，无5′–3′极性和多聚腺嘌呤尾巴。circRNA可能作为miRNA海绵或竞争性内源RNA(ceRNA)起作用，以调节miRNA靶标的表达。circRNA在真核生物中高度丰富和进化保守，在特定的细胞类型及不同阶段具有特异性。

近年来，越来越多的研究发现环状RNA与急性髓系白血病的发生发展密切相关。Wang J报道circ_0075451的异常表达可能导致AML的不良预后的独立危险因素，也可能是AML治疗的潜在靶点。Circ_HIPK2在APL患者中的表达明显低于正常外周单核细胞和其他AML亚型，其作为分化相关miR-124-3p的海绵，影响ATRA诱导的杀伤细胞分化，表明其作为APL生物标志物的潜在作用。因此发现和筛选白血病相关的circRNA标志物，对早期防治白血病具有重要的意义和价值。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明包括以下几个方面：

本发明提供一种环状RNA，所述环状RNA对应的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，起始两个核苷酸与最末两个核苷酸为成环结合位点。

所述环状RNA在circ-RNA数据库中的全称为hsa_circ_0059707，简称circ_0059707，定位于人类20号染色体正义链30193855-30194317区域，由ID1基因转录后经剪切环化而成。

本发明还提供一种用于扩增所述环状RNA的特异性扩增引物，所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物，其中，

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

具体地，所述上游引物的核苷酸序列为：5’-CGTTTGGTGCTTCTCAGATTTC-3’；

所述下游引物的核苷酸序列为：5’-CATGCCGCTTACCACCATCTAA-3’。

优选的，所述上游引物的GC含量为45％，所述下游引物的GC含量为50％。

优选的，所述上游引物的TM值为56.26，所述下游引物的TM值为58.13。

优选的，验证后上下游引物RQ-PCR使用时的最适合TM值为55.2。