[发明专利]诱发型炎癌转化小鼠模型及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种诱发型炎癌转化小鼠模型的建立方法，其包括以下步骤：

1）将过表达外源性致癌基因的重组质粒、睡美人转座酶表达质粒和可敲除目的抑癌基因的CRISPR/Cas9重组质粒共同溶解于生理盐水中，获得水动力基因转染注射液；

2）以小于5秒的速度将步骤1）获得的水动力基因转染注射液注于小鼠尾静脉中，随后正常喂养小鼠，当所述外源性致癌基因在小鼠肝脏中过表达，以及所述目的抑癌基因在小鼠肝脏中的表达被敲低后，建立诱发型炎癌转化小鼠模型；

所述睡美人转座酶表达质粒为pCMV/SB，所述过表达外源性致癌基因的重组质粒为过表达c-met基因的重组质粒和过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒，所述可敲除目的抑癌基因的CRISPR/Cas9重组质粒为可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒；其中所述睡美人转座酶表达质粒、过表达c-met基因的重组质粒、过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒、可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒的使用量各为5 μg～10 μg，且所述睡美人转座酶表达质粒、过表达c-met基因的重组质粒、过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒、可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒的使用量之比满足1:（1～2）:（1～2）:（1～2）:（1～2）；

在所述可敲除小鼠pten基因的重组质粒中，sgRNA的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示，在所述可敲除小鼠p53基因的重组质粒中，sgRNA的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）的具体操作为：将所述睡美人转座酶表达质粒、过表达外源性致癌基因的重组质粒、和可敲除目的抑癌基因的CRISPR/Cas9重组质粒溶解于相当于小鼠体重8%～12%的生理盐水中。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）的具体操作为：将所述睡美人转座酶表达质粒5 μg以及过表达c-met基因的重组质粒、过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒、可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒各10 μg溶解于相当于小鼠体重8%～12%的生理盐水中。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤2）中以小于5秒的速度将步骤1）获得的水动力基因转染注射液注于小鼠尾静脉中6周后，建立获得诱发型炎癌转化小鼠模型。

5.一种用于水动力基因转染获得诱发型炎癌转化小鼠模型的质粒组合，其由睡美人转座酶表达质粒、过表达外源性致癌基因的重组质粒、和可敲除目的抑癌基因的CRISPR/Cas9重组质粒组成；其中所述过表达外源性致癌基因的重组质粒为过表达c-met基因的重组质粒和过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒；所述可敲除目的抑癌基因的CRISPR/Cas9重组质粒为可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒；所述睡美人转座酶表达质粒为pCMV/SB；

在所述可敲除小鼠pten基因的重组质粒中，sgRNA的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示，在所述可敲除小鼠p53基因的重组质粒中，sgRNA的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；

其中在单次水动力基因转染中，所述睡美人转座酶表达质粒、过表达c-met基因的重组质粒、过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒、可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒的使用量各为5 μg～10 μg，且所述睡美人转座酶表达质粒、过表达c-met基因的重组质粒、过表达△N90-β-catenin基因的重组质粒、可敲除小鼠pten基因的重组质粒和可敲除小鼠p53基因的重组质粒的使用量之比满足1:（1～2）:（1～2）:（1～2）:（1～2）。