[发明专利]唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用

权利要求书

1.唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将唐古特虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草药材的量＝1:5拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品；

步骤2，微孔树脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第六个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr6，其中，所述微孔树脂柱的粗分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为乙醇，色谱条件为0～120min，0～100％B，120～150min，100％B，进样量为40g，流速为30mL/min；

步骤3，在线自由基抑制剂组分筛选：在所述唐古特虎耳草目标组分Fr6中加入体积浓度为80～100％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～120.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草目标组分Fr6样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选唐古特虎耳草目标组分Fr6中自由基抑制剂；其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18，250×4.6mm，5μm反相色谱柱，检测波长为254nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤4，高压反相色谱柱分离：唐古特虎耳草目标组分Fr6样品溶液B按聚酰胺的量：唐古特虎耳草Fr6组分样品的量＝2:1拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有反相C18填料的制备柱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，依次收集制备色谱图中第一个Fr6-1、第二个Fr6-2和第三个Fr6-3色谱峰馏分，色谱峰馏分Fr6-1经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂SaxitansinB；色谱峰馏分Fr6-2经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂Saxitansin C；色谱峰馏分Fr6-3经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂Saxitansin D；其中，高压反相制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250mm、直径20mm，反相色谱柱固定相为5μm的耐纯水C18填料，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，目标组分Fr6按照0～50min，33％B等度洗脱，进样量为0.4g，流速为19mL/min；

其中，所述的二芳基壬烷类Saxitansin B，Saxitansin C和Saxitansin D自由基抑制剂，分别命名为二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制，呈棕黄色油状，其分子式分别为C₂₂H₂₈O₆，C₂₁H₂₄O₅和C₂₃H₃₀O₆，其化学结构式分别为：

2.根据权利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤1、步骤2和步骤4中，减压干燥的条件均为：真空度50～250mbar，温度40～60℃。

3.根据权利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤3中，所述步骤3中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～35min，33％B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为50μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。

4.根据权利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，步骤3和4所述的耐纯水C18反相色谱柱为耐纯水ReprosilC18反相色谱柱或耐纯水Megres C18反相色谱柱。