[发明专利]唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅳ和Ⅲ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用

权利要求书

1.唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅳ和Ⅲ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将唐古特虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草药材的量＝1:5拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品；

步骤2，微孔树脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第五个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr5，其中，所述微孔树脂柱的粗分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为乙醇，色谱条件为0～120min，0～100％B，120～150min，100％B，进样量为40g，流速为30mL/min；

步骤3，在线自由基抑制剂组分筛选：在所述唐古特虎耳草目标组分Fr5中加入体积浓度为70～100％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为70.0～120.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草目标组分Fr5样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选唐古特虎耳草目标组分Fr5中自由基抑制剂；其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水7-X10，250×4.6mm，7μm反相色谱柱，检测波长为254nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤4，高压反相色谱柱分离：唐古特虎耳草目标组分Fr5样品溶液B按聚酰胺的量：唐古特虎耳草Fr5组分样品的量＝2:1拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有7-X10反相填料的制备柱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第二个主要的色谱峰馏分Fr5-2和第三个主要的色谱峰馏分Fr5-3，色谱峰馏分Fr5-2经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂SaxitansinA；色谱峰馏分Fr5-3经减压干燥即得含有新的二芳基壬烷类自由基抑制剂Saxitanside B的组分；其中，高压反相制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250mm、直径20mm，反相色谱柱固定相为7μm 7-X10填料，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，目标组分Fr5按照0～60min，10～45％B梯度洗脱，进样量为1.0g，流速为19mL/min；

步骤5，在线自由基抑制剂筛选：在唐古特虎耳草目标组分Fr5-3中加入体积浓度为70～100％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草目标组分Fr5-3的溶液，即滤液C，取1mL滤液C，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统筛选唐古特虎耳草目标组分Fr5-3中自由基抑制剂；其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18，250×4.6mm，5μm反相色谱柱，检测波长为254nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤6，高压反相柱制备：所述滤液C经反相C18制备柱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中对应的色谱峰馏分Fr5-3-1，该色谱峰馏分Fr5-3-1经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂Saxitanside B；其中，高压反相C18制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250mm、直径20mm，反相色谱柱固定相为5μm的耐纯水C18填料，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，目标组分Fr5-3按照0～40min，27％B等度洗脱，进样体积为1.0mL，流速为19mL/min；

其中，所述的二芳基壬烷类Saxitansin A自由基抑制剂和Saxitanside B自由基抑制剂，分别命名为二芳基壬烷类Ⅳ和Ⅲ自由基抑制，呈棕黄色油状，其分子式分别为C₂₁H₂₆O₆和C₂₇H₃₆O₁₀，其化学结构式分别为：