[发明专利]一种磁控荧光生物传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种磁控荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备磁控免疫探针MB-Ab，利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐EDC与N-羟基丁二酰亚胺NHS交联作用固定anti-CEA抗体在羧基化四氧化三铁磁珠MB上；

（2）制备脂质体包埋金簇复合物Biotin-Liposome/AuNCs；

（3）制备适配体修饰的脂质体包埋金簇复合物，即Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信号探针；

（4）利用Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信号探针结合磁控免疫探针构建检测癌胚抗原CEA的多重信号放大磁控荧光生物传感器，具体是利用MB-Ab磁控免疫探针分离富集血清样品中的癌胚抗原，链霉亲和素-生物素结合使包埋金纳米簇的脂质体聚集，将其作为癌胚抗原传感平台的多重信号放大途径，制备了检测癌胚抗原的多重信号放大的磁控荧光生物传感器；

检测时，先绘制传感器检测不同浓度的癌胚抗原的荧光信号工作曲线，再对临床血清样品中癌胚抗原的浓度进行检测。

2.根据权利要求1所述的磁控荧光生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述制备MB-Ab磁控免疫探针，包括如下步骤：

（1.1）将MB超声处理后经磁性分离，并用0.01M，pH为7.4的PBS洗涤2-3次；

（1.2）洗涤后加入EDC室温下震摇10 min，接着加入NHS继续震摇30 min，然后磁性分离并用pH为7.4的PBS洗涤2-3次，除去多余EDC和NHS，形成活化的MB并分散于PBS中；

（1.3）将anti-CEA抗体加入到活化的MB中并于室温下震摇3 h，接着磁性分离和洗涤2-3次，除去多余抗体，然后分散在1 mL的2.0 wt% BSA溶液中，室温下震摇1 h，最后保存于4℃冰箱中；

所述EDC和NHS的质量浓度比为6.72:1；

所述MB和anti-CEA抗体的质量浓度比为100:1，体积比为20:1。

3.根据权利要求1所述的磁控荧光生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述制备脂质体包埋金簇复合物Biotin-Liposome/AuNCs，包括如下步骤：

（2.1）将BSA加入烧杯中并用超纯水溶解，接着于37℃恒温水浴和强力搅拌条件下加入四氯金酸HAuCl₄溶液，2 min后再加入1 M NaOH 溶液，用pH试纸调至pH值为12，于37℃恒温水浴持续搅拌12 h得到金纳米簇AuNCs，将获得的AuNCs置于4℃的冰箱中保存待用；

（2.2）将二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC、磷脂聚乙二醇生物素DSPE-PEG-Biotin及胆固醇加入至50 mL 蒸馏瓶中，接着用3 mL 氯仿溶解，充分溶解后，在45℃条件下，通过旋转蒸发仪蒸去氯仿，形成一层脂质体薄膜粘附在烧瓶内壁上；

（2.3）在形成的脂质体薄膜中加入AuNCs和PBS，并在45℃水浴条件下搅拌30 min，最后超声5 min，即获得Biotin-Liposome/AuNCs悬浮溶液，保存于4℃冰箱中；

所述BSA与HAuCl₄溶液的体积比为1:1；

所述DSPC、DSPE-PEG-Biotin及胆固醇的质量浓度比为41.5:1:6.5；

所述AuNCs和PBS的体积比为4:1。

4.根据权利要求1所述的磁控荧光生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述制备适配体修饰的脂质体包埋金簇复合物，即Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信号探针，具体方法是：

（3.1）取步骤（2）中制备的Biotin-Liposome/AuNCs悬浮溶液 加入100 ng/mL链霉亲和素，混合震摇10 min；

（3.2）然后加入生物素化的CEA适配体50 μM，震摇30 min，获得Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信号探针，保存于4℃冰箱；

所述Biotin-Liposome/AuNCs与SA和CEA适配体的体积比为3:1.5:1。