[发明专利]生成双链衔接物的方法

权利要求书

1.一种用于生成双链衔接物的方法，所述双链衔接物可选地包含序列条码，所述方法包括，在单一反应容器或反应混合物中：

(a)将第一寡核苷酸库与第二寡核苷酸库相组合，其中所述第一寡核苷酸库内的每个寡核苷酸可选地包含可切割5’端，其中所述第二库中的每个寡核苷酸包含(i)与所述第一库中的寡核苷酸的一部分互补的序列；(ii)位于与所述第一库中的寡核苷酸的该部分互补的序列上游的可选条码序列；和(iii)位于所述条码上游的可切割5’端；

(b)使来自所述第一库的寡核苷酸与来自所述第二库的寡核苷酸杂交以形成双链体；

(c)延伸来自所述第一库的寡核苷酸，从而使来自所述第一库的寡核苷酸与同所述可选的条码序列互补并且与来自所述第二库的寡核苷酸的可切割5’端互补的序列共价连接；

(d)切割所述可切割5’端以产生包含所述可选条码序列并包含一个或多个突出端的双链衔接物；以及，可选地，

(e)使所述双链衔接物与包含一个或多个突出端的多个双链核酸分子相连接。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二寡核苷酸库包含十二种或更多种不同的条码序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述5’可切割端选自由以下组成的组：rA、rC、rG、rU或dU。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述条码序列是随机的。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述条码序列是非随机的。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述条码序列是半简并的。