[发明专利]一种将永生化淋巴细胞系重编程为诱导多能干细胞的方法

说明书

本发明提供一种将永生化淋巴细胞系重编程为诱导多能干细胞的方法。该重编程方法主要为向永生化淋巴细胞中通过核转法导入表达外源重编程因子的附加体质粒，重编程因子包括OCT3/4、shP53、SOX2、KLF4、LIN28及L‑MYC。本发明能够高效地将永生化淋巴细胞系重编程为iPSC，附加体质粒不会整合进宿主细胞基因组，同时会随细胞增殖而逐渐丢失，从而能够适时沉默外源表达，降低细胞致瘤风险。本发明获得的iPSC具有典型的干细胞形态和与ESC相似的特性，表达细胞干性基因，有分化为外胚层、中胚层、内胚层组织的分化潜能。本发明重编程效率高，且致瘤性低，拓展了永生化淋巴细胞系的临床研究价值，具有应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种将永生化淋巴细胞系重编程为诱导多能干细胞的方法。

背景技术

2006年Yamanaka和Takahashi通过成功利用小鼠细胞获得诱导多能干细胞(induced Pluripotent Stem Cell，iPSC)，这一方法是通过逆转录病毒载体将四种转录因子Sox2(sex determining region Y box protein 2)、Oct4(octamer bidingtranscription factor 4)、c-Myc(cellular myelocytomatosis oncogene)和Klf4(kruppel like factor 4)导入小鼠成纤维细胞的。经过重编程获得的iPSC具有与胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESC)相似的细胞特征，如表达干性标志基因、具有三胚层分化潜能等(Takahashi K,Yamanaka S.Induction of pluripotent stem cells from mouseembryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell.2006；126(4):663-76.)。在2007年，Yamanaka团队克服转染效率低下的问题，调整前述方法成功获得人源iPSC(Takahashi K,Tanabe K,Ohnuki M,Narita M,Ichisaka T,Tomoda K,YamanakaS.Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by definedfactors.Cell.2007；131(5):861-72.)。同一时期，Thomson团队利用慢病毒载体的方法，将人类成纤维细胞重编程为iPSC，该方法中使用的转录因子主要为Sox2、Oct3/4、Nanog和Lin28(Yu J,Vodyanik MA,Smuga-Otto K,Antosiewicz-Bourget J,Frane JL,Tian S,NieJ,Jonsdottir GA,Ruotti V,Stewart R,Slukvin II,Thomson JA.Induced pluripotentstem cell lines derived from human somatic cells.Science.2007；318(5858):1917-20.)。