[发明专利]茶树自交育种的方法

权利要求书

1.茶树自交育种的方法，其特征在于，所述方法包括：在茶树开花前期，在茶园搭建防虫网大棚，大棚内只保留一个茶树品种；在茶树开花时期，在大棚内配置蜜蜂，利用蜜蜂进行自花授粉，并进行自交后代的鉴定；

利用SSR和InDel共8个分子标记对自交种进行鉴定，用于扩增SSR和InDel标记的8对引物分别如SEQ ID NO：1和2、SEQ ID NO：3和4、SEQ ID NO：5和6、SEQ ID NO：7和8、SEQ IDNO：9和10、SEQ ID NO：11和12、SEQ ID NO：13和14、SEQ ID NO：15和16所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)自交亲本的选择：结合前期大田试验统计结果选择花期长、结实率较高的品种作为育种目标；

(2)防虫网大棚的搭建：在茶树开花前期，在茶园搭建一个防虫网大棚，大棚内只保留一个茶树品种；

(3)田间管理：选择好亲本后，在春茶过后，不再对目标茶树进行修剪，增施磷钾肥；待大棚内的茶树开花前期，对对茶树下部老叶烂叶进行清理，并适时修剪；

(4)蜂传授粉：在茶树开花时期，在大棚内放置蜂巢，利用蜜蜂进行自花授粉；

(5)自交后代的鉴定：利用SSR和InDel分子标记结合高通量毛细管电泳检测技术鉴定自交种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，茶树同排株距为0.4-0.6米，相邻亲本的行距为1.2-1.5米。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，防虫网大棚的长度10米，宽度4.5米，高度2.5米，防虫网的孔目为80目，防虫网材质为尼龙纱帐。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)中蜂巢放置时间为每年10月中旬，蜂巢中放置蜜蜂8000头。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，大棚内配置的蜂种为中华蜜蜂。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)包括：次年待茶果成熟发褐时，采摘茶果除皮后晾晒，后期播种于育苗圃，待茶籽发芽长成幼苗时单棵移栽至资源圃，并利用SSR和InDel分子标记结合高通量毛细管电泳检测技术鉴定自交种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(5)包括如下子步骤：

1)利用改良的CTAB法提取亲本和子代幼苗的基因组DNA；

2)以1)提取的DNA为模板，利用8对引物进行PCR扩增；

3)利用毛细管电泳检测技术检测PCR扩增产物，根据电泳带型判定子代是否为自交种。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，PCR反应体系为：DNA模板1-1.2μL，10μM上、下游引物各0.5μL，2×Taq Plus Master Mix 5μL，用ddH₂O补齐至10μL；

PCR反应程序为：94-95℃预变性3-5min；94℃变性30s，55-60℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸5min。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，茶树品种为舒茶早。