[发明专利]基于人源化肝细胞共培养细胞组合的体外代谢活化系统及其应用

权利要求书

1.一种基于人源化肝细胞的体外共培养细胞组合，至少含有人源化的肝细胞系HepG2/C3A细胞和人源化肝非实质细胞和人源化其他器官细胞；所述的人源化肝非实质细胞是HUVEC脐静脉内皮细胞。

2.权利要求1所述的体外共培养细胞组合，其特征在于：进一步含有人源化其他器官细胞；所述的人源化其他器官细胞是人肾小管上皮HK-2细胞。

3.一种基于权利要求1或2所述体外共培养细胞组合的体外代谢活化系统，它是由权利要求1或2所述的体外共培养细胞组合与共培养培养基组成的共培养模型。

4.权利要求3所述的体外代谢活化系统，其特征在于：所述的共培养培养基含有MEM培养基、血清和抗生素；优选的方案中，所述的血清是胎牛血清FBS，所述的抗生素至少包含青霉素和链霉素。

5.权利要求3所述的体外代谢活化系统，其特征在于：所述的共培养培养基由MEM培养基中加入10％～20％体积的胎牛血清FBS和1％～5％体积的青链霉素混合液和50％体积的ECM培养基得到。

6.一种基于人源化肝细胞的体外共培养方法，包括：将对数生长期的人源化的肝细胞系HepG2/C3A细胞与HUVEC脐静脉内皮细胞接种至共培养支持物，培养至贴壁后，加入共培养培养基，在常规培细胞养条件下培养3-4天。

7.一种基于人源化肝细胞的体外共培养方法，包括：将对数生长期的人源化的肝细胞系HepG2/C3A细胞、HUVEC脐静脉内皮细胞和人肾小管上皮HK-2细胞接种至共培养支持物，培养至贴壁后，加入共培养培养基，在常规培细胞养条件下培养3-4天。

8.权利要求7或8所述的体外共培养方法，其特征在于：所述的共培养培养基由MEM培养基中加入50％体积的ECM培养基、10％～20％体积的胎牛血清FBS和1％～5％体积的青链霉素混合液得到。

9.权利要求7或8所述的体外共培养方法，其特征在于：所述的共培养采用非接触式共培养方式，即将所述的各细胞分别接种至相邻培养孔底部，所述相邻培养孔之间设有间隔壁，所述间隔壁上部设有通孔，允许培养基在所述相邻培养孔之间互通。

10.一种权利要求7或8所述的体外代谢活化系统在化学物质毒理学安全评价中的应用；所述的化学物质毒理学安全评价优选包括遗传毒性试验或致突变性试验；所述的遗传毒性试验是体外检测染色体和染色体组畸变的试验、体外检测基因突变的试验、细菌致突变试验(Ames试验)或体外哺乳动物细胞DNA损伤与修复/非程序DNA合成试验；所述的体外检测基因突变的试验进一步优选是对Pig-a基因、TK基因或HPRT基因的检测试验。