[发明专利]一种微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法及应用

说明书

本发明提供了一种微创可溶栓的脑卒中模型制作方法，包括以下步骤：将小鼠麻醉，在小鼠身下放置恒温毯，在小鼠颈正中间位置剪开刀口，将胸锁乳突肌牵开，暴露颈总动脉和颈分岔，将磁铁放置于颈总动脉下方，并用钛金属动脉瘤夹暂时夹闭颈外动脉，吸取配置好的凝血酶磁珠，注射入尾静脉，在颈总动脉处聚集的凝血酶磁珠与流动的血液形成颈动脉血栓，移去磁铁，镊子轻夹血栓，向上移动，缝合颈部皮肤，形成脑卒中模型。不仅操作简单方便，节约时间，还能提高制作模型的成功率。与传统脑卒中模型的手术方法相比，本发明减少了手术时间，提高了手术的成功率，对脑缺血发病机制及药物筛选打下了坚实基础。

技术领域

本发明涉及医疗模型技术领域，尤其是涉及一种微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法及应用。

背景技术

脑是人类的重要器官之一，其重量仅为体重的2％，但其耗氧量则占全身耗氧量的20％，其所需血供占心输出量的15％，因此对氧和血的要求特别高，极易受到缺血性损害，其中由大脑中动脉梗塞造成的脑缺血尤为常见。中华人民共和国卫生部官方网站提供的统计数据显示，脑血管疾病在城市和农村疾病死亡原因中均排名第二位，仅次于恶性肿瘤。脑血管病包括缺血性和出血性脑血管病，其中缺血性脑血管病占80-85％。大脑中动脉是常见的出血或梗塞发生部位。制作模拟人脑缺血模型对脑缺血发病机制及药物筛选有重要意义。

目前最经典的脑卒中模型为大脑中动脉线栓(MCAO)，MCAO是middle cerebralartery occlusion的缩写形式，中文意思为中脑动脉栓塞。大脑中动脉栓塞模型是经颈内动脉入颅并插入大脑中动脉，从而阻塞大脑中动脉供应脑一侧半球的血供。简单描述为将鱼线从颈动脉插入，一直前进到大脑中动脉的位置。但这种模型无法模拟真实脑梗血栓形成与溶栓治疗。因此，对于应用溶栓药物治疗，只能选择开颅后，将凝血酶(促进血栓形成)注射入大脑中动脉分叉的局部，或者在体外形成血凝块，从颈内动脉打入，随血流栓塞在大脑中动脉处。这两种制作方法，较为复杂，且动物死亡率高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微创可溶栓的脑卒中模型制作方法，不仅操作简单方便，节约时间，还能提高制作模型的成功率，本发明还提供微创可溶栓的脑卒中模型的应用。

本发明提供一种微创可溶栓的脑卒中模型制作方法，包括以下步骤：

将小鼠麻醉，在小鼠身下放置恒温毯，在小鼠颈正中间位置剪开刀口，将胸锁乳突肌牵开，暴露颈总动脉和颈分岔；

将磁铁放置于颈总动脉下方，并用钛金属动脉瘤夹暂时夹闭颈外动脉，吸取凝血酶磁珠，注射入尾静脉，所述凝血酶磁珠为羧基化磁珠与凝血酶反应形成的带凝血酶的磁珠，在颈总动脉处聚集的凝血酶磁珠与流动的血液形成颈动脉血栓，移去磁铁，镊子轻夹血栓，向上移动；

缝合颈部皮肤，形成脑卒中模型。

优选地，小鼠进行麻醉时，将小鼠放置于气麻机的麻醉诱导盒中，通入麻醉剂。

优选地，所述麻醉剂为异氟烷，流量为1.5％-2％，所述恒温毯的温度设置为37±0.2℃，温度影响血栓的形成，需要控制温度。

优选地，所述吸取凝血酶磁珠的体积为150ul-160ul。

优选地，所述颈总动脉血栓形成的时间为3-5min。

优选地，所述刀口长度为1-1.5cm，所述磁铁为圆形，直径为2mm。

优选地，所述的凝血酶磁珠的制备方法包括以下步骤：

S1.磁珠活化：将羧基化磁珠通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与N-羟基琥珀酰亚胺试剂混合激活，后放置于2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中，再进行混匀，得到活化后的磁珠；

S2.凝血酶与活化磁珠链接：将步骤S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗，随后加入凝血酶，再进行混匀；