[发明专利]一种用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置及操作方法

权利要求书

1.一种用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，包括操作盒、载片、密封盖和支撑组件，所述操作盒包括盒体和盒盖，所述盒盖用于盖设于所述盒体上，所述盒体底部设置有排液口，所述密封盖用于安装于所述排液口上，且所述密封盖设置于所述盒体外侧，所述支撑组件设置于所述盒体的内壁上，所述载片包括孔板和多个盛装筒，多个所述盛装筒间隔设置于所述孔板上，所述孔板用于安装于所述支撑组件上。

2.根据权利要求1所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，所述支撑组件包括两个可折叠挂钩，两个所述可折叠挂钩对称设置于所述盒体的两个内壁上，所述孔板两端对称设置有两个条形孔，一个条形孔用于安装于一个所述可折叠挂钩上。

3.根据权利要求2所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，所述可折叠挂钩包括固定板和转动板，所述固定板用于固定于所述盒体的内壁上，所述固定板下端设置有向外倾斜设置的半圆柱板，所述半圆柱板与所述盒体的内壁之间存在限位空隙，所述转动板一端上部设置有支撑板，所述支撑板与所述转动板相互垂直，所述转动板另一端上部和下部分别设置有铰接板和圆弧板，所述铰接板与所述圆弧板之间设置有间隙，所述铰接板铰接于所述半圆柱板上，所述圆弧板能够沿所述半圆柱板外侧转动，所述圆弧板能够卡接于所述限位空隙中，一个所述条形孔用于安装于一个所述支撑板上。

4.根据权利要求1所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，所述盒体的内底面设置有圆弧形凹槽，所述排液口设置于所述圆弧形凹槽的中部。

5.根据权利要求1所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，所述盒体的外底面设置有避让槽，所述避让槽与所述排液口位置相对应，所述密封盖设置于所述避让槽中。

6.根据权利要求1所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，各所述盛装筒一侧标记有编号，所述编号设置于所述孔板上。

7.根据权利要求1所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置，其特征在于，所述操作盒为不透明操作盒，所述盒盖铰接于所述盒体上部的一侧。

8.一种如权利要求1-7中任一项所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置的操作方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取出待测单细胞并进行吹打，用磷酸缓冲溶液调节细胞密度制备出细胞悬液；

步骤二、将正常熔点琼脂糖溶解于磷酸缓冲溶液并进行水浴得到正常熔点琼脂糖溶解液，将低熔点琼脂糖溶解于磷酸缓冲溶液并进行水浴得到低熔点琼脂糖溶解液；

步骤三、将所述载片安装于所述支撑组件上，将所述正常熔点琼脂糖溶解液滴于所述盛装筒中，盖上盖玻片，进行固化形成第一层凝胶，取下盖玻片，将所述细胞悬液与所述低熔点琼脂糖溶解液混合均匀形成混合液，将所述混合液滴加于所述第一层凝胶上，盖上所述盖玻片，使其均匀铺开，进行固化；

步骤四、将细胞裂解液倒入所述操作盒中，确保细胞裂解液覆盖凝胶，进行裂解，裂解完成后取下所述密封盖使得细胞裂解液由所述操作盒中排出，之后将所述密封盖安装于所述排液口上；

步骤五、用磷酸缓冲溶液冲洗凝胶及所述操作盒内壁，排出废液，关闭所述排液口，向所述操作盒中倒入碱性电解缓冲溶液，使得碱性电解缓冲溶液的液面盖过凝胶，进行解旋，解旋完成后取下所述密封盖使得碱性电解缓冲溶液由所述操作盒中排出，之后将所述密封盖安装于所述排液口上；

步骤六、将所述载片放入水平电泳槽中，向所述水平电泳槽加入碱性电解缓冲液，进行电泳；

步骤七、电泳后取出所述载片，擦去所述载片上的碱性电解缓冲液，将所述载片安装回所述支撑组件上，向所述操作盒中放入Tris-HCl缓冲液进行浸洗中和，中和完成后取下所述密封盖使得Tris-HCl缓冲液由所述操作盒中排出，之后将所述密封盖安装于所述排液口上；

步骤八、向每个所述盛装筒中加入染色液进行染色，染色后冲洗，之后用荧光显微镜观察细胞。

9.根据权利要求8所述的用于单细胞凝胶电泳实验的操作装置的操作方法，其特征在于，在步骤一中，所述细胞悬液的细胞密度为10⁵-10⁶个/mL；在步骤二中，将0.1g正常熔点琼脂糖溶解于10mL磷酸缓冲溶液并置于45℃的水中进行水浴得到所述正常熔点琼脂糖溶解液，将0.15g低熔点琼脂糖溶解于10mL磷酸缓冲溶液并置于37℃的水中进行水浴得到所述低熔点琼脂糖溶解液；在步骤三中，将120-150ul所述正常熔点琼脂糖溶解液滴于所述盛装筒中，盖上所述盖玻片，置于4～25℃固化10分钟，取下所述盖玻片，将80μL所述细胞悬液与400μL所述低熔点琼脂糖溶解液混合均匀形成所述混合液，并滴加50μL所述混合液于所述第一层凝胶上，盖上所述盖玻片，使其均匀铺开，置于4～25℃固化20分钟，备用；在步骤四中，所述细胞裂解液由89mL NaOH溶液、10mL DMSO和1mLtritonX-100试剂混合制成，置于4～25℃裂解1-1.5h；在步骤五中，调节碱性电解缓冲溶液的液面高度至液面盖过凝胶2～3mm，于4～25℃放置20min以便DNA解螺旋破坏细胞膜和核膜；在步骤六中，电泳电压为25V，电泳电流300A，电泳时间20min；在步骤七中，用吸水纸吸干所述载片上的碱性电解缓冲液，将所述载片放入4～25℃的0.4M Tris-HCl缓冲液浸洗15min；在步骤八中，向每个所述盛装筒中加入50μL溴化乙锭染色液，染色5min，染色后冲洗2-3次。