[发明专利]一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法

权利要求书

1.一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，构建表达TBH的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-TBH

根据已报导的异色瓢虫来源酪胺-β-羟化酶的氨基酸序列进行密码子优化后，全基因合成优化后的序列，亚克隆到载体pET28a上，获得重组质粒pET28a-TBH，将构建好的重组质粒pET28a-TBH用氯化钙法转化进入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)，得到酪胺-β-羟化酶表达菌种BL21(DE3)/pET28a-TBH；

步骤2，培养TBH的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-TBH

挑取表达TBH的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-TBH的单菌落，接种于LB培养基，37℃培养至OD值达到0.4以上，再加入0.2mM-1mM的IPTG，15-30℃培养10-18小时，离心收集表达酪胺-β-羟化酶的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-TBH；

步骤3，收集表达酪胺-β-羟化酶的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-TBH，用pH2-9的缓冲液重悬后，使用匀浆破碎仪，破碎完成后，4000-8000rpm，4℃，离心8-10min获得TBH粗酶液，并用酶标仪测定蛋白浓度；

步骤4，选取酪胺作为底物，加入辅因子抗坏血酸、富马酸、铜离子、过氧化氢酶、再添加缓冲溶液调节反应体系的pH至2-9，最后加入TBH粗酶液0.5-50g/l，20-60℃反应0.1-24h(在有氧条件下进行)，得到产物章鱼胺。

2.根据权利要求1所述的一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法，其特征在于，步骤4中所述的催化条件为：温度50℃、pH＝5。

3.根据权利要求1所述的一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法，其特征在于，步骤2中所述产酶条件为：加入IPTG的量为0.5mM、诱导温度为20℃。

4.根据权利要求1所述的一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法，其特征在于，步骤4中所述辅因子中富马酸、铜离子浓度均为0.1mM-10M。过氧化氢酶的浓度为0-1g/L。

5.根据权利要求4所述的一种基于酪胺-β-羟化酶催化产章鱼胺的方法，其特征在于，步骤4中所述抗坏血酸、富马酸的浓度均为0.5mM、铜离子浓度为2mM、过氧化氢酶浓度为12.5ug/l。