[发明专利]生物活性组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种生物活性组合物，其特征在于，包括干细胞分泌物和石墨烯-聚丙烯酸-RADA16-A纳米颗粒，两者的质量比为(5-20)：(1-10)；

所述干细胞分泌物按照以下步骤制备而成：先将碘海醇与脐带干细胞共培养，再加入药物同时施加X射线辐照培养，然后弃去培养液并清洗后加入无血清培养基继续培养，最后收集细胞培养液，富集后得到干细胞分泌物；

X射线的强度为0.5-2Gy；

所述药物选自20-60μM白藜芦醇、0.2-0.5μM地塞米松，0.2-2μM TN14003冻干粉，0.2-2μM T140冻干粉或0.2-1μM AMD3100冻干粉中的至少一种；

所述石墨烯-聚丙烯酸-RADA16-A纳米颗粒按照以下步骤制备而成：

(a)将二异氰酸酯修饰到石墨烯表面；

(b)加入聚丙烯酸，使得聚丙烯酸的羧基与石墨烯表面的二异氰酸酯反应，得到双亲性石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒；

(c)用交联活化剂活性双亲性石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒，继而使短肽RADA16-A与双亲性石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒反应，得到石墨烯-聚丙烯酸-RADA16-A纳米颗粒；

其中，所述RADA16-A为精氨酸封端的RADA16。

2.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，包括按质量百分比计的如下组分：干细胞分泌物0.5-2％，石墨烯-聚丙烯酸-RADA16-A纳米颗粒0.1-1％，酵母溶胞物0.1-0.4％，积雪草根提取物0.1-0.5％，迷迭香提取物0.05-0.15％，海藻糖0.1-0.4％，EDTA二钠0.01-0.02％，水80-99％。

3.根据权利要求2所述的生物活性组合物，其特征在于，还包括按质量百分比计的如下组分：透明质酸钠0.5-2.5％，棕榈酰四肽-70.1-0.6％，烟酰胺0.1-0.3％，泛醇0.02-0.07％，黄原胶0.02-0.06％，甘油3-5％和丁二醇2-6％。

4.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，碘海醇的质量浓度为2-100μg/mL。

5.根据权利要求4所述的生物活性组合物，其特征在于，碘海醇的质量浓度为10-20μg/mL。

6.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

碘海醇与脐带干细胞共培养1-2天后再加入药物。

7.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

X射线辐照后培养的时间为1-4天。

8.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

加入无血清培养基后培养的时间为1-4天。

9.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，步骤(c)中，石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒与短肽RADA16-A的质量比为1：(0.5-1)。

10.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

所述石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒的反应浓度为10-15mg/mL。

11.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

所述聚丙烯酸的数均分子量为5000-10,000。

12.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

在步骤(c)中，先将短肽RADA6-A溶解于有机溶剂中，调节至pH至6.5-7.5，再与活化的双亲性石墨烯-聚丙烯酸纳米颗粒反应。

13.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，

所述交联活化剂包括EDC和NHS。