[发明专利]一种靶向脂滴荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明属于蛋白检测荧光探针技术领域，提供一种靶向脂滴荧光探针及其制备方法和应用，该荧光探针为含有S,N,O杂原子的有机小分子荧光探针，其分子式为C₂₂H₁₆N₂OS₂，有较好的水溶性，另一方面探针分子靶向脂滴特异性生物成像，能区分正常细胞和癌细胞。荧光探针分子结构中具有三苯胺基团，能靶向脂滴；在PBS缓冲溶液中，探针和HSA作用，发射波长蓝移且荧光增强。其应用包括两方面：探针靶向脂滴特异性生物成像，能区分正常细胞和癌细胞；能在HeLa细胞中用于HSA的成像，能灵敏检测尿液中HSA的浓度。本发明荧光探针合成简单，水溶性好，能准确靶向脂滴，对HSA检测线性范围窄，灵敏度高。

技术领域

本发明属于蛋白检测荧光探针技术领域，具体涉及一种靶向脂滴荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

人血清蛋白（HSA），是循环系统中最丰富的运输蛋白，在调节渗透压，参与免疫调节和运输营养物质、代谢物质、药物分子等方面起着至关重要的作用。血浆中的HSA浓度通常为35-50 mg / mL，在尿液中的浓度不超过30 mg / L。 HSA作为临床诊断的重要参数，其浓度的异常与冠心病，多发性骨髓瘤，糖尿病，肝硬化等多种疾病相关。到目前为止，HSA的检测方法主要包括蛋白质组学技术，放射免疫分析，电化学和荧光探针技术。荧光探针由于响应时间快，灵敏度高，操作简单，价格便宜等优点受到了广泛关注。因此，发展准确，快速，高效的荧光探针方法检测 HSA 的含量对特定疾病的诊断具有重要意义。

脂滴（LDs）是多功能细胞器，由磷脂单分子层及中性脂组成的疏水核心构成，并且表面分布着很多蛋白，其功能障碍与许多代谢疾病如肥胖、脂肪肝、心血管疾病及糖尿病有关。最近的研究表明，癌细胞由于脂质代谢异常，与正常细胞相比，存在大量极性较低的脂滴。因此，利用癌细胞中存在大量脂滴，可以设计靶向脂滴型荧光探针达到特异性识别癌细胞的目的。

发明内容

本发明旨在提供一种靶向脂滴荧光探针及其制备方法和应用，该荧光探针为含有S, N, O杂原子的有机小分子荧光探针，有较好的水溶性，在PBS（pH=7.4 ，20 mM）缓冲溶液中对HSA的响应具有高选择性、高灵敏度，在HeLa细胞中用于HSA的成像，能灵敏检测尿液中HSA的浓度。另一方面探针分子靶向脂滴特异性生物成像，能区分正常细胞和癌细胞。

本发明由如下技术方案实现的：一种靶向脂滴荧光探针，该荧光探针为含有S, N,O杂原子的有机小分子荧光探针，其分子式为C₂₂H₁₆N₂OS₂，结构式如下：

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制备所述靶向脂滴荧光探针的方法，具体步骤为：向对二苯氨基苯甲醛的无水乙醇溶液中加入罗丹宁和尿素，将混合物加热回流10-14h；通过TLC确认完成后，将冷却的混合物过滤，用冷乙醇洗涤得到产物；其中：每1 mmol对二苯氨基苯甲醛使用溶剂无水乙醇12mL；对二苯氨基苯甲醛：罗丹宁：尿素的摩尔比为1：1-1.2：1.3-1.7。

一种靶向脂滴荧光探针的应用，所述荧光探针用于尿液中HSA浓度的检测。

具体检测方法为：在2 mL、pH为7.4的PBS缓冲溶液中加入10 µM探针分子，随后加入0.1 mg/mL 的HSA，检测体系荧光变化，在PBS缓冲溶液中，探针分子的最大吸收峰位置在468 nm，荧光发射波长在610 nm；加入HSA后，最大吸收峰的位置蓝移至448 nm，荧光发射强度增强且发射波长蓝移至575 nm；在PBS缓冲溶液中：检测HSA的线性范围为0.01-0.09 mg/mL，检出限为0.98 µg/mL；