[发明专利]一种流式细胞仪荧光微球质控品及其制备方法

说明书

本发明公开了一种流式细胞仪荧光微球质控品及其制备方法，包括空白微球0.3g～1g、溶胀介质100mL～250mL、疏水性染料2mg～10mg和溶胀剂20mL～50mL，称取前向散射光变异系数小于3％的空白微球0.3g～1g，并将所述空白微球溶于质量分数为1～5％的溶胀介质中，并利用超声强度为50％～100％的超声破碎仪超声1min～5min，称取2mg～10mg的疏水性染料，并溶于20mL～50mL的溶胀剂后，加入所述混合溶液，得到微球分散体系；将所述微球分散体系进行超声、振荡、旋转蒸发，并在离心洗涤后得到流式细胞仪荧光微球质控品。

技术领域

本发明涉及流式细胞仪用荧光微球技术领域，尤其涉及一种流式细胞仪荧光微球质控品及其制备方法。

背景技术

流式细胞仪是测量细胞的散射光和标记荧光强度的细胞分析仪，可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个细胞特征参数，进行定性和定量分析，具有速度快、精度高、准确性好等特点，成为当代最先进的细胞定量分析技术，被广泛应用于临床实践中。目前国内流式细胞仪荧光微球质控品全部依赖于进口，价格昂贵。国内虽然有少部分适用于流式细胞仪的荧光微球标准物质，但只能满足单一特定的荧光通道，不能同时满足多个通道的检测，使操作变得繁琐。

荧光微球的染色可分为外部染色和内部染色两种，其中外部染色是使用带特定基团的微球与荧光染料直接通过化学键偶联得到，该方法简单可控，对微球本身不会造成影响，但稳定性差，不适宜用于质控品的制备；内部染色包括制备微球时同时加入染料，使染料被包裹在微球内部和使用成品微球溶胀加入染料，前者所得荧光微球稳定性很好，但反应条件苛刻，容易使染料淬灭，后者反应条件较为温和，所得荧光微球的稳定性也较高，除染料本身因素外，溶胀法制备荧光微球所用的溶胀剂、溶胀介质、反应比例等条件也直接影响所得荧光微球荧光强度的均一性，因此开发一种适用于流式细胞仪荧光微球质控品的制备方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种流式细胞仪荧光微球质控品及其制备方法，均一性高，稳定性好，能很好的满足流式细胞仪的质控需求。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种流式细胞仪荧光微球质控品的制备方法，包括以下步骤：

将称取的空白微球溶于溶胀介质并超声混匀，同时将溶于溶胀剂的疏水性染料加入混合溶液，得到微球分散体系；

将所述微球分散体系进行超声、振荡、旋转蒸发，并在离心洗涤后得到流式细胞仪荧光微球质控品。

其中，将称取的空白微球溶于溶胀介质并超声混匀，同时将溶于溶胀剂的疏水性染料加入混合溶液，得到微球分散体系，包括：

称取前向散射光变异系数小于3％的空白微球0.3g～1g，并将所述空白微球溶于质量分数为1～5％的溶胀介质中，并利用超声强度为50％～100％的超声破碎仪超声1min～5min，得到混合溶液；

称取2mg～10mg的疏水性染料，并溶于20mL～50mL的溶胀剂后，加入所述混合溶液，得到微球分散体系。

其中，将所述微球分散体系进行超声、振荡、旋转蒸发，并在离心洗涤后得到流式细胞仪荧光微球质控品，包括：

利用超声强度为50％～100％的超声破碎仪对所述微球分散体系超声1min～5min，并在超声结束后，在温度为室温，转速为100～200r/min的恒温摇床上振荡30min～90min；

将振荡后的所述微球分散体系进行旋转蒸发和离心洗涤，得到流式细胞仪荧光微球质控品。

其中，将振荡后的所述微球分散体系进行旋转蒸发和离心洗涤，得到流式细胞仪荧光微球质控品，包括：

在设定的蒸发条件下，利用旋转蒸发仪将振荡后的所述微球分散体系进行旋转蒸发，并在蒸发完成后，在相对离心力为2000～4000g的离心机下，离心2min～5min；