[发明专利]一种编码GA3ox-氧化酶的基因及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种编码GA3ox‑氧化酶的基因及其应用。一种编码GA3ox‑氧化酶的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明通过半荧光定量分析法测定GA3ox‑氧化酶基因表达量对早期预判供试材料是否具有矮化特性的方法简单高效。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种编码GA3ox-氧化酶的基因及其应用。

背景技术

矮化种植是农作物生产不变的发展趋势。植物矮化主要分为遗传性矮化和生理性矮化。单一基因突变属于遗传性矮化，其矮化激励多为基因合成蛋白，蛋白影响激素，激素影响表型；受环境因素影响，导致植株表型发生变化，属于生理性矮化，其矮化作用机理多为环境变化影响植物激素分泌，最终导致变化。但不论哪种矮化模式，都要通过激素来影响表型，植株生长过程中的激素多与赤霉素有关。

矮化基因的研究是阐释矮化特性的重要手段。GA3ox(GA3-氧化酶)是活性赤霉素生物合成途径的关键一步，催化转化GA₁₂和GA₅₃分别生成活性的GA₁和GA₄。GA3-氧化酶受反馈和正馈机制调节。当体内活性GA水平低时，GA3ox的转录水平明显升高；当体内活性GA水平高时，外源GA处理时GA3ox转录受到抑制。深入研究GA3ox的生物合成过程，克隆调控这一过程的关键基因，并对其表达产物进行分析就显得尤为必要。

目前，拟南芥、甘蔗、小麦、苜蓿、黄瓜、油菜、苹果和葡萄等多种植物的GA3ox基因被挖掘，越来越多的矮化基因被报道，为植物矮化分子机理研究提供丰富的素材。

通过对比具有乔化特性和矮化特性植物材料GA3ox基因的表达量，在植物童期预判是否具有矮化特性的，既省时又省力，该方法变得十分迫切和必要。

发明内容

为了克服上述技术的不足，本发明提供了一种编码GA3ox-氧化酶的基因及其应用，其可以预判芒果实生苗早期是否具有矮化特性。

本发明解决问题所采用的技术方案：

一种编码GA3ox-氧化酶的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了所述的编码GA3ox-氧化酶的基因在早期预判芒果实生苗是否具有矮化表型特性。

另外，本发明还提供了所述编码GA3ox-氧化酶基因测定基因表达量的方法，包含以下步骤：

(1)克隆编码GA3ox-氧化酶的基因；

(2)将编码GA3ox-氧化酶基因与表达质粒连接构建重组表达质粒；

(3)将重组表达质粒线性化与纯化；

(4)将纯化后的重组表达质粒转化受体菌，筛选后获得基因工程菌；

(5)将基因工程菌诱导表达，纯化鉴定后获得GA3ox-氧化酶。

本发明所述的GA3ox-氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。所述GA3ox-氧化酶由381个氨基酸组成，分子量为42620.09Da，理论等电点为5.17。

本发明还提供了一种重组表达质粒，所述重组表达质粒由表达质粒和编码GA3ox-氧化酶的基因重组而得。

作为优选，所述表达质粒为真核表达质粒pEAYS-T1。

另外，本发明还提供了了一种基因工程菌，所述基因工程菌由所述的重组表达质粒转化宿主菌而得。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明从供试材料中直接获取GA3ox-氧化酶基因序列，分析该基因理化活性，把该基因作为调控矮化性状的指标。