[发明专利]一种用于新型冠状病毒N蛋白表达的大肠杆菌表达培养基

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于新型冠状病毒N蛋白表达的大肠杆菌表达培养基。本发明提供的培养基包括蛋白胨和酵母提取物，但是不包含NaCl，而是加入一种A试剂，所述A试剂可以为C₄H₁₁NO₃·HCl或磷酸氢二钠、磷酸二氢钾两种成分。使用本发明制备的培养基培养的含有新型冠状病毒N蛋白基因的大肠杆菌BL21，其表达的蛋白中杂蛋白的量大大减少，降低了后期纯化难度。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于新型冠状病毒N蛋白表达的大肠杆菌表达培养基。

背景技术

大肠杆菌是外源基因表达的主要宿主之一，它的应用非常广泛，且具有遗传 背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，抗污染能力强，大规模发酵经济等优 点。2019-nCoV蛋白分为：刺突糖蛋白(S蛋白)、包膜糖蛋白(E蛋白)、膜糖 蛋白(M蛋白)，和核衣壳蛋白(N蛋白)。为获得新型冠状病毒N蛋白，我 们将带有能表达N蛋白的外源基因的质粒转化至大肠杆菌中进行诱导表达，并 做纯化。通常大肠杆菌的发酵培养基配为LB培养基，但带有N蛋白外源基因的 大肠杆菌在LB培养基中经诱导表达后，它所产生的蛋白除了N蛋白之外，还有大量杂蛋白，其中部分杂蛋白经多种纯化方式仍然无法除去。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺陷，本发明提供了一种用于新型冠状病毒N蛋白表达的大肠杆菌表达培养基。使用本发明制备的培养基培养的含有新型冠状病毒N蛋白基因的大肠杆菌BL21，其表达的蛋白中杂蛋白的量大大减少，降低了后期纯化难度。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于新型冠状病毒N蛋白表达的大肠杆菌表达培养基，包含蛋白胨，酵母提取物及A试剂。

优选地，所述蛋白胨的添加量为10g，所述酵母提取物的添加量为5g。

优选地，所述A试剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾两种成分组成。

优选地，所述磷酸氢二钠的最终质量浓度为1.45-5.8g/L；所述磷酸二氢钾的最终质量浓度为0.13-0.52g/L。

优选地，所述A试剂为C₄H₁₁NO₃·HCl。

优选地，所述C₄H₁₁NO₃·HCl最终质量浓度为1.576-4.728g/L。

本发明还提供所述培养基的制备方法，制备过程如下：用天平称取培养基中各组分的量，用900mL的纯化水溶解，并混合均匀，然后用浓度为1mol/L的 NaOH溶液调节pH值至8.5，用纯化水定容至1L，于121℃下高压灭菌20min 即得。

本发明提供的培养基是发明人通过大量试验，对LB液体培养基进行改良，去掉了LB液体培养基中本来含有的NaCl，使大肠杆菌所表达的蛋白中杂蛋白的量减少，从而方便后续的蛋白的纯化。

与现有技术相比，本发明提供的培养基具有如下优势：使用本专利配方的培养基培养含有新型冠状病毒N蛋白基因的大肠杆菌BL21，其表达的蛋白中杂蛋白的量减少了，在23kD附近的一条杂带含量明显减弱。这减少了非特异性蛋白对后续纯化的影响，降低了后期纯化难度。

附图说明

图1为本发明提供的大肠杆菌表达培养基的实施例的结果验证图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解释，但是应当注意的是，以下实施例仅用以解释本发明，而不能用来限制本发明，所有与本发明相同或相近的技术方案均在本发明的保护范围之内。本实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域常规技术方法和仪器说明书内容进行操作；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。