[发明专利]一种基于HPLC-MS/MS诊断泌尿结石的试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种基于高效液相色谱‑串联质谱检测受试者生物样本中标志物组合含量的试剂盒，属于泌尿结石标志物检测领域。其中，所述试剂盒包括所述标志物组合的分离检测试剂，所述标志物组合包括柠檬酸和异柠檬酸，进一步地，所述标志物组合还包括草酸和胱氨酸。利用本发明，可能实现柠檬酸含量的精准测定，可以进一步用于诊断受试者是否患有泌尿结石，或者用于预测受试者是否具有患泌尿结石风险，或者用于评估泌尿结石患者接受结石治疗的效果，或者用于预测泌尿结石患者治疗痊愈后是否具有复发风险，具有重大的临床意义和巨大的经济效益。

技术领域

本发明属于泌尿结石标志物检测领域，具体地，涉及一种基于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)诊断泌尿结石的试剂盒和应用。

背景技术

泌尿结石(Nephrolithiasis)是晶体物质在泌尿系统的异常聚积所致，为泌尿系统的常见病，严重可引起尿路感染、腹痛、肾积水、肾功能衰竭等。泌尿结石发病率高，中国南方地区发病率高达5-10％，且易复发，手术后患者生活质量低，对患者家庭和社会负担巨大，很多患者在出现症状之后才会发现结石，无法在早期及时评价结石风险，且对于结石手术后治疗效果的评估、尚缺乏有效检测方式。结石复发率极高，因此，建立合适的风险评估模型及检测手段，对结石患者治疗效果进行评估、预测患者结石复发或者发生风险具有重要的现实意义。

传统确定结石的方法通常是医学影像如B超、X线或者CT检测，患者检查时须已经产生结石，因此，此方法并不能用于早期结石预测。在评估结石患者的治疗效果方面也有一定滞后性。

近年来，生物标志物的出现，如尿中草酸、尿酸及钙等物质，使预测结石发生及评估结石患者治疗效果成为可能。然而，人体具有一个整体的代谢系统，结石产生受多种因素综合影响，现有的生物标志物缺乏整体研究数据。

代谢组学是通过研究生物体的大范围代谢物变化情况，综合评价生物的状况。目前代谢组学已经在多个人类疾病研究领域得到应用。然而在泌尿结石方面，尚缺乏此类综合数据，因此以代谢组学方法对泌尿结石进行研究更具有现实意义。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，发明人以代谢组学为基础，综合研究了中国泌尿结石患者与对照组人群代谢物，发现了有效的生物标志物，并进一步建立了有效生物标志物的绝对定量分析方法，旨在建立提供精准诊断泌尿结石的技术体系。为了实现这个目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种基于高效液相色谱-串联质谱检测受试者生物样本中标志物组合含量的试剂盒，所述试剂盒包括标志物组合的分离检测试剂，其中，所述标志物组合包括柠檬酸和异柠檬酸。

柠檬酸作为草酸钙的抑制剂，是一种重要的泌尿结石标志物。异柠檬酸和柠檬酸是同分异构体的内源性物质，其存在会影响泌尿结石的诊断结果。

在本发明的一些实施方案中，所述分离检测试剂包括衍生试剂。在本发明的一些优选实施方案中，所述衍生试剂为C3-C6醇类。使用C3-C6醇类作为衍生试剂，可以进一步通过高效液相色谱-串联质谱实现柠檬酸和异柠檬酸的分离，提高检测或诊断准确度。

进一步地，所述标志物组合还包括草酸和胱氨酸。草酸和胱氨酸同样是泌尿结石的重要标志物。将草酸和胱氨酸联合起来进行检测，可以进一步提高诊断的准确度。

在本发明的一些实施方案中，所述C3-C6醇类是指具有3～6个C原子的醇。利用醇类进行衍生，具有至少两个方面的好处：一方面，由于其不是利用氨基来衍生，因此，氨基酸上的氨基不会对醇类衍生剂产生干扰，可同时实现对氨基酸如胱氨酸的衍生。另一方面，由于醇类不存在空间位阻，可将柠檬酸与异柠檬酸内部的羟基暴露出来，扩大因羟基位置差异而使柠檬酸与异柠檬酸与色谱填料之间作用力的差异，从而达到完全基线分离的目的。进一步的，C3-C6醇衍生化以后能够提高整个分子在质谱中的响应，从而增加检测的灵敏度和准确度。

在本发明的一些具体实施方案中，所述衍生试剂为正丁醇。