[发明专利]一种酯酶检测荧光探针、制备方法及应用

说明书

本发明公开了提供一种酯酶检测荧光探针，该探针具有高选择性和高灵敏度。本发明的酯酶检测荧光探针，其具有如式结构HBT‑EA、HBT‑MA‑EA或HBT‑Py‑EA所示的苯并噻唑衍生物：

技术领域

本发明涉及一种荧光探针、制备方法及应用，更具体地说涉及一种酯酶检测荧光探针、制备方法及应用。

背景技术

酯酶是生物体中一类发挥着重要作用的酶，它可以催化酯水解成相应的醇和酸，具有很高的底物特异性。酯酶可以调节各种代谢功能，包括基因表达，酯代谢，物质转运和排毒。另外，酯酶也是重要的药物靶标和前药激活剂。研究结构表明，当生物体内的酯酶浓度水平不能维持在正常的生理水平范围内时，将会导致生物体的多种疾病，例如：沃尔曼病，肥胖症，动脉粥样硬化，癌症，高脂血症和肝脂肪变性。由此可见，监测并维持细胞内正常的酯酶浓度水平对很多细胞功能是至关重要的。

目前为止，已开发了多种检测酯酶的方法，包括比色法，分光光度法，平板测定法和色谱法，但是，这些方法大多操作复杂，并且无法实现有效灵敏的实时检测。而荧光探针方法的检测反应迅速，选择性高，灵敏度高，操作简便，可以实现酯酶的实时无损成像。因此，该方法在生物成像中具有广泛的应用。

近年来，一些能特异性检测酯酶的小分子荧光探针被报道，但是也出现了水溶性差、灵敏度低，不适宜细胞成像等缺陷，这些缺陷很大程度上影响了探针的应用。因此，开发出能克服这些缺陷的能够高效检测酯酶的新型荧光探针是非常必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：克服现有技术存在的不足，提供一种酯酶检测荧光探针，该探针具有高选择性和高灵敏度。

此外，本发明还提供该荧光探针的制备方法以及该探针在酯酶检测中的实际应用。

本发明的技术构思和原理如下：该基于苯并噻唑衍生物探针可选择性与酯酶反应并产生强烈荧光，且在0-0.2U/mL酯酶浓度范围内，所产生的荧光强度与酯酶浓度有着较好的线性关系。本发明人首次制备酯酶检测荧光探针即相关苯并噻唑衍生物并首次将其用于酯酶的选择性检测，从而解决现有技术中存在的问题。

本发明解决其技术问题的技术方案如下：

本发明的酯酶检测荧光探针，其具有如式结构HBT-EA、HBT-MA-EA或HBT-Py-EA所示的苯并噻唑衍生物：

本发明上述的酯酶检测荧光探针的制备方法，其包括以下步骤：

将HBT、HBT-MA或HBT-Py分别与溴甲基乙酸酯、碳酸铯在无水N,N-二甲基甲酰胺中反应生成如式结构HBT-EA、HBT-MA-EA或HBT-Py-EA所示的苯并噻唑衍生物即为酯酶检测荧光探针。

本发明上述的酯酶检测荧光探针的制备方法，其进一步的技术方案是所述的反应在N₂保护且避光条件下，20-30℃温度下反应8-12h。

本发明上述的酯酶检测荧光探针的制备方法，其再进一步的技术方案是所述的反应后进行纯化：将去离子水缓慢加入反应液中，在此过程中逐渐产生沉淀；然后收集沉淀过滤，真空干燥，得到粗产物；最后，将粗产物通过硅胶柱层析进一步纯化得到酯酶检测荧光探针。

本发明上述的探针可以在检测酯酶中进行应用，主要用于环境中酯酶含量的检测、生物样本中酯酶荧光显影、含量检测。

本发明具有以下有益效果：

1)本发明荧光探针在pH＝7.4的缓冲溶液中几乎没有荧光，与酯酶反应后分别释放出强烈的绿色和红色荧光。

2)采用本发明荧光探针后，检测灵敏度高，对酯酶的检测限可达到1.22×10-4U/mL。