[发明专利]检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明适用于生物医学技术领域，提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用，该检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒包括酶标板，所述酶标板上固定有新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE‑2。本发明通过将新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白通过物理吸附的方法固定在酶标板上，固定在酶标板上的新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白再与辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE‑2特异性结合形成配体复合物，既增强了保护酶标蛋白的活性的作用，同时也减少了酶标蛋白的用量，而且缩减了操作步骤和检测时间。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒(2019-nCov病毒)严重威胁了人类生命和健康，其中和抗体可以起到保护作用。简单、快速的检测手段和方法是诊断、治疗、预后、疫苗效果观察的有效的方法。

2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2，2019-nCoV)是冠状病毒科β属的一个分型，是一种具有包膜的线性单股正链RNA病毒。2019-nCoV具有几种结构蛋白，其中的刺突蛋白(S)包含一个受体结合域(RBD)，负责识别细胞表面受体血管紧张素转化酶2(ACE2)。RBD蛋白与人ACE2受体会发生强烈作用，使病毒进入宿主细胞并进行病毒复制。病毒感染后，会引发免疫反应，在血液中产生可保护宿主、防止再次受到病毒感染的抗体，此抗体被称为中和抗体。在新冠病毒感染后产生的抗体并非都是中和抗体，而仅中和抗体可以保护机体避免受到病毒侵害，因此，在临床上对于新型冠状病毒中和抗体的测定对于临床诊断及预后具有重大意义。

当前病毒中和检测金标准是需要在专业的生物防护设施(三级生物安全实验室，BSL3)中使用活病毒。该检测方法不仅十分昂贵，具有生物安全风险，而且很慢，通常需要3-5天才能拿到结果。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，旨在解决背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，所述酶标板上固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白通过物理吸附的方法固定在所述酶标板上。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：

将缓冲液和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到包被液；

用包被液对酶标板进行包被处理后，再经洗涤，得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板；

将高碘酸钠溶液与辣根过氧化物酶溶液进行避光混合后，再加入乙二醇进行混合，得到混合液；

往混合液中添加受体蛋白ACE-2进行混合，并添加缓冲液调整pH值后，再进行透析处理，得到透析液；

往透析液中加入硼氢化钠溶液进行避光混合后，再进行透析处理，得到得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2；

将辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2进行稀释，并加入到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中进行二次包被处理后，再经洗涤、封闭和干燥处理，得到所述试剂盒。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述包被液中，新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的浓度为80～120ng/mL。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述步骤中，包被处理的温度为3～5℃。