[发明专利]一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用。本发明以无血清培养基为前提，通过添加EGF、FGF及相关营养物质，成功建立了以GH3细胞系为基础的生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC，该细胞系具有干细胞的特性，可稳定传代，同时具有高体外成球能力和高体内致瘤能力，可用于制备肿瘤动物模型，为生长激素型垂体腺瘤的发生发展分子机制的研究、药物的开发与筛选及诊断试剂的研发提供了有力的工具，是生长激素型垂体腺瘤基础研究和临床前期应用的理想细胞系。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体而言，涉及一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用。

背景技术

垂体腺瘤的发病率在颅内肿瘤中排名第三，虽然绝大多数垂体腺瘤为良性病变，但却长期困扰着大量的患者。其中，约12％的垂体腺瘤患者表现为外周血生长激素升高，通过IGF-1和GH的作用，患者常表现为肢端肥大，通常伴有嘴唇，舌头，鼻子，手和脚的增大，骨骺未融合的幼儿患者则会表现为巨人症，这种垂体腺瘤称为生长激素型垂体腺瘤(Growthhormone-pituitary adenoma，GH-PA)。 GH-PA是临床上常见的功能性垂体腺瘤，仅次于泌乳素型垂体腺瘤，占垂体腺瘤的10％-15％。肿瘤本身占位效应导致患者头痛，垂体功能低下和视野缺陷， GH-PA也是肢端肥大症最常见(99％)的病因。GH-PA虽病程进展缓慢，但常常并发心肌肥厚、高血压、糖尿病、呼吸暂停综合征等慢性并症，严重危害患者的健康和生活质量。

大部分情况下，GH-PA的首选治疗是经蝶窦外科切除腺瘤，但由于一些侵袭性肿瘤及巨大腺瘤的存在，无法完全切除，残留肿瘤的再生使该病有复发的可能，需要联合放疗和化疗。在少数情况下，一些学者认为，药物可以作为治疗 GH-PA的首选，包括麦卡角林、生长激素受体拮抗剂和生长抑素类似物等。但对于GH-PA侵犯海绵状肿瘤，放疗效果在肿瘤减少和生物缓解率方面均较差，同时药物治疗存在不良反应。虽然GH-PA是良性肿瘤，但治疗效果仍不容乐观，深入研究GH-PA的发病机制具有重要意义。GH-PA的发病机制复杂，同时，由于活检病理的不可取性、缺乏分泌功能性激素的人类垂体细胞系和难以重塑激素分泌或非功能性人垂体肿瘤表型的动物模型等原因，人类垂体肿瘤发病机制目前仍尚未完全阐明。

大量的研究表明肿瘤的发生与增殖取决于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞特性的细胞，即肿瘤干细胞(Cancer stem cells，CSCs)，肿瘤干细胞的存在是肿瘤无限增殖的重要机制，目前，已经证实垂体腺瘤中亦存在肿瘤干细胞，具有增殖、多向分化的潜能。虽然相关研究学者对生长激素型垂体腺瘤进行了大量的研究，但是对于GH-PA发生发展的分子机制仍未阐明。在现今临床和科研应用中均缺乏较为成熟的垂体瘤干细胞细胞系，也是目前临床和科研应用中亟需解决的技术问题。本发明针对目前该领域存在的上述问题，以无血清培养基为前提，通过添加EGF、FGF及相关营养物质，成功建立了以GH3细胞系为基础的生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC(GH3 stem cell，简称为GH3SC)。可为下一步探索垂体腺瘤的发生发展机制及治疗过程提供实验材料。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，提供一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC，具体涉及一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用。

本发明构建的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC可稳定传代，具有肿瘤干细胞的特性、高的体外成球能力和高的体内致瘤能力，该细胞系可用于生长激素型垂体腺瘤发生发展分子机制的研究、药物的开发与筛选、诊断试剂的研发、生长激素型垂体腺瘤相关的新的生物标志物的发现及耐药机理的研究中，是生长激素型垂体腺瘤基础研究和临床前期应用的理想细胞系。

根据本发明的第一个方面，本发明提供了一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系，其特征在于，所述细胞系命名为GH3SC，于2020年11月30日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.21017；