[发明专利]一种杀鼠灵完全抗原及其制备方法

说明书

本申请属于毒物检测技术领域，具体涉及一种杀鼠灵完全抗原及其制备方法专利申请事宜。其由杀鼠灵与BSA采用直接偶联方式，或者采用先半抗原、再全抗原方式制备。动物免疫制备抗体过程中，由于小分子化合物缺乏免疫原性，因此往往需要对其进行适当分子改造，以使其成为具有免疫原性的完全抗原，进而才能进一步免疫动物小鼠以产生和制备获得单克隆抗体。本申请中，发明人分别采用直接偶联和先半抗原、再完全抗原方式，分别制备了偶联BSA的WFR‑BSA完全抗原。并利用该所制备完全抗原分别进行了单克隆抗体的制备。初步实验结果表明，免疫后小鼠体内血清效价较高，能够有效激活小鼠的免疫反应，为相关单克隆抗体制备奠定了较好技术基础。

技术领域

本申请属于毒物检测技术领域，具体涉及一种杀鼠灵完全抗原及其制备方法专利申请事宜。

背景技术

杀鼠灵又名法华林（warfarin），为一种抗凝血型杀鼠剂，主要用于杀灭小家鼠，大家鼠、褐家鼠等家栖鼠，也可用于灭野鼠，其作用方式是进入鼠体后通过阻碍血液中的凝血酶原的合成，进而通过抗凝血作用使鼠体内出血而致死，因其良好环境安全性，因此在世界范围内广泛使用。

尽管杀鼠灵有较好的环境安全性，但同时也因其较强动物毒性、易购性和其广泛应用性，也导致一些家禽、家畜甚至儿童误服事件屡屡发生，因此，从公共安全角度出发，及时检测和判断相关毒性特征是否是由杀鼠灵所导致的，对于相关救治和预防具有十分重要的技术意义。

现有技术中，检测样品中是否有杀鼠灵残留时，常用方法为液相色谱-质谱检测，但该方法需要配备专业的技术人员和昂贵的实验设备，加上检测时间较长，因此容易延误相关救治。免疫学检测方法具有检测速度快、实验技术要求低和对实验设备要求简单等特点，对于杀鼠灵的快速检测和判定具有较好的技术意义。但免疫学方法的实现需要基于特定抗体才能制备相关的胶体金试纸条、SPR检测芯片、ELISA试剂盒等免疫检测产品。但现有技术中针对杀鼠灵抗体的相关研究和报道较为有限，由此也导致现有技术缺乏相关免疫产品开发。为此，开发相关杀鼠灵相关抗原、抗体产品，并基于此开发相关免疫产品，对于杀鼠灵的快速检测和相关救治显然具有十分重要的技术意义。

发明内容

本申请目的在于提供一种制备杀鼠灵单克隆抗体用杀鼠灵完全抗原以及基于此的单克隆抗体，从而为相关检测用免疫制品的制备奠定一定技术基础。

本申请的技术方案详述如下。

一种杀鼠灵完全抗原WFR-BSA，其由杀鼠灵（华法林，Warfarin）与BSA偶联制备而成，具体通过如下步骤制备获得：

（一）物料预备

分别按照如下物料比例及要求，制备相关物料备用：

称取Warfarin，用甲醇溶解配制成5mg/ml的溶液备用；

将BSA溶解到结合缓冲液中，制备成5mg/ml溶液备用；

将18mg的EDC (2mM)（碳二亚胺，（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）、27mg的NHS(5mM)（N-羟基琥珀酰亚胺）加入到30ml的偶联缓冲液中，充分溶解后制备成活化剂备用；

所述结合缓冲液（即，偶联缓冲液），为pH=4.5-5.0的0.1M MES溶液；

上述制备过程中，也可采用Sulfo-NHS（N-羟基硫代琥珀酰亚胺）代替NHS；

（二）基团偶联

基团偶联时，采用直接偶联方式，或者采用先半抗原、再全抗原方式制备；

采用直接偶联方式制备完全抗原Warfarin-BSA（WFR-BSA）时，参考如下步骤：

（1）将BSA溶液与活化剂混合（体积比计，1:1），室温反应1h（或者37℃保温30min），确保所有氨基已偶联活化基团；

（2）将Warfarin甲醇溶液1ml与步骤（1）中的活化BSA溶液2ml，混合均匀，-80℃冷冻干燥过液以确保冻干；