[发明专利]一组检测小麦近缘物种通用标记及其应用

说明书

本发明公开了一组检测小麦近缘物种的通用标记及其应用，属于作物分子生物学与遗传育种领域。建立的分子标记可以对小麦中是否含有外源染色体进行有效检测。本发明获得的特异分子标记不仅可用于小麦近缘物种的筛选、鉴定，还可以应用于辅助选育抗病小麦新品系/品种，提高筛选效率，缩短育种时间，具有积极的产业化价值。

技术领域

本发明属于作物分子生物学与遗传育种领域，具体涉及一组检测小麦近缘物种通用标记及其应用。

背景技术

小麦近缘物种中含有丰富的抗病、抗逆和抗虫等优异基因，是改良小麦抗病、抗逆等性状的珍贵基因库。随着小麦远缘杂交和染色体工程研究的深入开展，含抗病、抗逆等优异基因的外源染色体或染色体片段被导入小麦，创制出了一大批优良的中间材料，为丰富普通小麦的遗传基础和性状改良提供了重要的物质基础。

刘旭等（2000）利用RAPD引物对高大山羊草及对照进行分析，建立了可以用于检测小麦背景中高大山羊草染色体的RAPD标记。王春梅等（2007）利用STS引物对中国春、黑麦、普通小麦－黑麦1R－7R二体异附加系进行分析，建立了黑麦1R染色体特异STS标记。Zhang等（2012）根据小麦EST序列设计引物对小麦、簇毛麦以及小麦-簇毛麦渐渗系进行扩增，建立了簇毛麦5VS特异EST标记。Mattera等（2015）利用EST引物对智利大麦和小麦等材料进行扩增，建立了智利大麦7H^ch染色体EST标记。Liu等（2016）利用一套小麦-拟斯卑尔脱山羊草附加系和代换系为材料，开发了拟斯卑尔脱山羊草S基因组染色体特异EST标记和SSR标记。

上述标记要么是建立了某一小麦近缘物种特异标记，要么是建立了小麦近缘物种某一条染色体（臂）特异分子标记。然而，目前可用于同时区分不同小麦近缘物种的分子标记，以及可同时用于检测小麦背景中不同近缘物种的通用标记还未见报道。

发明内容

为了解决以上现有技术中检测小麦近缘物种通用标记缺乏的问题，本发明提供了一套能够快捷、有效、简便地检测小麦近缘物种的分子标记。

本专利通过筛选小麦A、B和D染色体共线性基因某一内含子三个亚基因组间长度差异超过10bp的区域，在该内含子上下游的外显子保守序列处设计引物，利用小麦为对照，小麦的近缘物种、小麦-近缘物种杂交种质等为材料，进行PCR扩增验证，建立了能检测小麦近缘物种的通用标记，对筛选鉴定小麦外缘材料、小麦-近缘物种杂交种质、分离群体以及选育含近缘物种血缘的小麦品系/品种均具有重要意义。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明通过自主筛选小麦A、B和D染色体共线性基因某一内含子三个亚基因组间长度差异超过10bp的区域，在该内含子上下游的外显子保守序列处设计引物，对小麦族黑麦属、簇毛麦属、大麦属、偃麦草属、山羊草属等物种进行PCR扩增验证，建立了能检测小麦近缘物种的通用标记。

本发明提供了一组检测小麦近缘物种的通用标记，其特征在于：为下列25对引物序列中的一对以上的组合，其碱基序列如下：

本发明提供一组检测小麦近缘物种的通用标记，可以在检测小麦近缘物种染色体、基因中应用。

所述的应用，其特征在于，所述的检测的步骤如下：

（1）以待测的普通小麦、小麦近缘物种和小麦-近缘物种杂交种质的基因组总DNA为模板，分别对其进行PCR扩增，扩增产物使用PAGE凝胶电泳进行检测；

（2）如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中含有与对照不同的特异多态性条带，则说明待测物种还有小麦外源染色体。

优选的，步骤（2）中所述的对照为中国春小麦。