[发明专利]实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法及应用

权利要求书

1.一种实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法，其特征在于：所述实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法通过阻断鱼类的性类固醇激素合成通路，获得XX性别遗传型的伪雄鱼，再将所述伪雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，得到全雌群体，实现鱼类性别控制育种；

所述阻断鱼类的性类固醇激素合成通路的具体方法为：采用基因编辑技术敲除鱼类的性类固醇激素合成通路催化酶编码基因，来阻断鱼类性类固醇激素的合成；

所述性类固醇激素合成通路催化酶编码基因为cyp17a1催化酶编码基因；

所述实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法包括如下步骤：

S1，利用基因编辑技术敲除鱼类中的cyp17a1基因，直接或者间接获得cyp17a1纯合子鱼，其基因型为cyp17a1-/-；

S2，在所述cyp17a1纯合子鱼中，筛选获得XX性别遗传型的cyp17a1纯合子鱼，其表现为生理雄性，记为伪雄鱼，基因型为cyp17a1-/- XX；

S3，将基因型为cyp17a1+/+ XX的野生型雌鱼和基因型为cyp17a1-/- XX的所述伪雄鱼进行人工催产和授精；

S4，经人工催产和授精后，获得的F3代全部是基因型为cyp17a1+/- XX的全雌群体，实现鱼类性别控制育种与单性群体的养殖；

所述鱼类为雄性异配遗传决定型的水产养殖经济鱼类。

2.根据权利要求1所述的一种实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法，其特征在于：所述基因编辑技术为采用CRISPR/Cas9系统特异性切割鱼类的cyp17a1基因，实现鱼类cyp17a1基因的敲除；

所述S1中，间接获得cyp17a1纯合子鱼的具体过程为：

S11，利用基因编辑技术敲除鱼类中的cyp17a1基因，获得F0代；

S12，将F0代雄鱼与野生型雌鱼进行杂交，获得有效突变的F1代cyp17a1杂合子鱼，其基因型为cyp17a1+/-；

S13，将所述F1代cyp17a1杂合子鱼进行自交，筛选获得F2代cyp17a1纯合子鱼，其基因型为cyp17a1-/-。

3.根据权利要求2所述的一种实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法，其特征在于：在步骤S1中，所述利用基因编辑技术敲除鱼类中的cyp17a1基因的具体过程为：

P1，基于CRISPR/Cas9系统，设计鱼类cyp17a1基因编辑靶位点；

P2，根据所述鱼类cyp17a1基因编辑靶位点设计相应的引物，并合成含有所述鱼类cyp17a1基因编辑靶位点的扩增片段，记为gRNA；

P3，按预定比例配制gRNA、Cas9 mRNA的注射混合物，得到cyp17a1基因编辑的注射混合物，并将所述cyp17a1基因编辑的注射混合物进行鱼类受精卵的显微注射。

4.根据权利要求3所述的一种实现XX/XY性别遗传决定型鱼类性别控制育种的方法，其特征在于：所述鱼类cyp17a1基因编辑靶位点位于cyp17a1基因1号外显子上，分为第一靶位点和第二靶位点，前述两者的基因序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述鱼类为鲤科鱼类。