[发明专利]一种金针菇金6168菌种及其SSR标记指纹图谱的鉴定方法和构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种金针菇金6168菌种及其SSR标记指纹图谱的鉴定方法和构建方法与应用，包括该指纹图谱由6对SSR标记组成。构建方法包括：(1)菌丝培养；(2)基因组DNA的提取；(3)SSR分子标记的检测；(4)毛细管电泳检测。应用包括：对金针菇菌种进行SSR标记扩增，将得到的带型与指纹图谱对照，与该组指纹图谱一致即为金针菇金6168菌种。本发明与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短、准确性高、可重复性好的优点，在收集的国内外105个金针菇栽培主栽菌种中具有金针菇金6168菌种的专一性。

技术领域

本发明属于金针菇菌种的检测技术领域，具体涉及一种金针菇金6168菌种及其SSR标记指纹图谱的鉴定方法和构建方法与应用。

背景技术

金针菇(Flammulinafiliformis)是一种普遍栽培的食用菌，通常分为白色和黄色品种。其栽培历史悠久，生产总量逐年提升，目前已成为我国工厂化食用菌企业中发展速度最快、规模最大的一个品种。我国工厂化栽培金针菇的日产量约占我国食用菌工厂化总产量的47.12％。金针菇营养丰富、味道鲜美且兼具药用价值，不仅富含蛋白质、矿物质和维生素等各种营养成分，而且具有抗肿瘤、增强免疫调节、抗病毒、降血脂、抗疲劳和护肝等多种药用保健作用，深受消费者喜爱。

优质菌种在金针菇单产和质量中的贡献率举足轻重。我国的金针菇工厂化栽培菌株以国外选育的首潮产量高、生长周期短和耐储藏的白色菌株为主导。与国外相比，国内金针菇育种工作相对滞后，也是导致目前国产菌株市场占有率小的原因。但是相对于目前主导的工厂化菌株而言，我国有着丰富的金针菇野生和自然栽培资源，高效利用这些优质的资源，拓展菌株的遗传基础，有利于国内高产、优质、特色金针菇菌株的选育。1999年，我国签署了《国际植物新品种保护法》，这不仅要求我们尊重其它国家的品种知识产权，同时也要加强保护我们国家自己的品种知识产权。为了建立食用菌新品种登记制度来真正保护我国的品种产权，必须首先建立成熟的品种鉴定技术，为新品种登记奠定基础。就国内而言，金针菇栽培菌种多样性低导致的产品同质化现象，不仅给生产企业带来了经济损失，也极大地影响了中国金针菇产业的快速发展；另一方面，工厂化栽培方式和菌株退化现象对金针菇栽培菌株质量的要求越来越高，需要发展更为简便、快速、精准的菌株鉴定技术，以保证每批次使用的都是优质、准确的菌种。

针对上述金针菇产业发展现状，利用现代分子生物学技术开发精准有效的金针菇菌种鉴定体系是一项极为重要的工作。

发明内容

金针菇(Flammulinafiliformis)金6168，于2021年1月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No：61488。

本发明所要解决的技术问题是提供一种金针菇“金6168”菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用，该指纹图谱与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短，准确性高，重复性好的优点。

本发明的一种金针菇“金6168”菌种的SSR标记指纹图谱，该指纹图谱由6 对SSR标记组成，是基于金针菇基因组简单重复序列片段开发SSR引物，扩增带型好，重复性高的SSR引物，标记详细信息如表1：

表1 SSR标记详细信息列表

本发明的一种金针菇“金6168”菌种的SSR标记指纹图谱的构建方法，包括：

(1)菌丝培养：将金针菇菌种转接到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(PDA) 上，25℃培养7d后收集菌丝；

(2)基因组DNA的提取：用TAKARA公司的TaqHotStart扩增试剂盒提取上述菌丝的基因组DNA，紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度，调整样品DNA的浓度一致；

(3)SSR分子标记的检测：对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增；