[发明专利]一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1‑10M/L、Tris质量浓度为10‑100mM/L、EDTA的质量浓度为10‑100mM/L、Triton X‑100的体积分数为2％；或所述结合液中，硫氰酸胍的质量浓度为1‑10M/L、Tris的质量浓度为10‑100mM/L、EDTA的质量浓度为10‑100mM/L、吐温20的体积分数为1.5％。所述磁珠采用硅羟基磁珠。本发明的干血斑基因组核酸试剂盒及提取方法能够做到提取多种血液相关样本，不仅是干血斑，还包括血液样本，血凝块样本，血纱和富含血细胞的组织样本；而且提取效力高、纯度佳、产品稳定性强。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法。

背景技术

干血斑中提取基因组核酸是一种极为常见的需求，比如婴幼儿遗传病筛查，亲子鉴定，成人多种疾病的检测，法医侦查等，需要提取干血斑中淋巴细胞的基因组，通过对于基因组的分析，其结果对于临床医学疾病诊断及治疗十分重要。目前，干血斑提取基因组DNA主要有柱膜法和磁珠法两种，为了使整个试剂盒不含有毒物质，保证了操作人员的安全，其他方法如饱和酚-氯仿法，盐析沉淀法已经基本不采用；此外，柱膜法提取不能用于机器，也不适用于自动法高通量操作，而且提取效力一般。

目前，干血斑提取基因组DNA的提取方法很难做到每次都能提到完整的基因组DNA，并且很难做到没有碎片和拖尾现象，因此，亟需研发一种干血斑基因组DNA提取试剂、试剂盒，以提取片段完整、质量稳定、条带整洁的基因组DNA，以来满足企业客户和研究所、各大高校和医疗机构相关人员的需求。

发明内容

为此，本发明提供一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明实施例提供一种DNA提取试剂，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；

其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1-10M/L、Tris质量浓度为10-100mM/L、EDTA的质量浓度为10-100mM/L、Triton X-100的体积分数为2％；

或所述结合液中，硫氰酸胍的质量浓度为1-10M/L、Tris的质量浓度为10-100mM/L、EDTA的质量浓度为10-100mM/L、吐温20的体积分数为1.5％；

所述磁珠采用硅羟基磁珠。

优选的，所述DNA提取试剂包括漂洗液和洗脱液；

所述漂洗液包括第一漂洗液和第二漂洗液；

所述第一漂洗液中，PEG 6000 5-10％(w/v)、NaCl 20-50mmol/L，溶剂为无菌水；

所述第二漂洗液为75-80％的乙醇；

所述洗脱液为pH为8.0，1M/L Tris或RNase-free水。

优选的，所述裂解液中，异硫氰酸胍的摩尔浓度为0.5-5mol/L、SDS的浓度为0.1-5％、Tris-HCl缓冲液的浓度为10-80mmol/L、EDTA的浓度为0.5-10mmol/L、NaCl的浓度为5-50mmol/L、Triton X-100的体积分数为0.1-2.0％、吐温20的体积分数为0.1-2.0％。

优选的，所述磁珠的粒径为200-600nm。

本发明实施例还提供一种DNA提取试剂盒，所述DNA提取试剂盒包括上述所述的DNA提取试剂。

优选的，所述的DNA提取试剂盒还包括离心管、与磁力架配合使用。