[发明专利]一种羟基积雪草苷的发酵转化的方法与应用

说明书

本发明涉及一种转化高含量的羟基积雪苷，也能够利用微生物转化反应生产高活性积雪草酸及其衍生物的积雪草发酵液及其制备方法与应用，本发明的积雪草经嗜热栖热菌发酵后，转化生成了羟基积雪草苷及积雪草酸，其中羟基积雪草苷含量提升200‑8000倍，积雪草发酵后的功效，比如：抗炎、创伤修复、抗氧化、美白、皮肤细胞修复能力(光损伤修复、划痕修复)也显著提升。

技术领域

本发明属于发酵领域，涉及积雪草发酵，尤其涉及一种利用微生物转化反应转化富含羟基积雪苷的制备方法，以及羟基积雪草苷发酵液的应用。

背景技术

积雪草是积雪草(拉丁学名：Centellaasiatica(L.)Urban)，又称雷公根、铜钱草、马蹄草，为伞形科植物积雪草的全草。积雪草原产于印度，现广泛分布于世界热带、亚热带区，在我国主要分布于长江以南各省。积雪草全草的主要活性成分有积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸。积雪草长久以来被作为健脑药、利尿药和麻风病、溃疡的辅助药以及皮肤病用药。

天然药物积雪草具有强烈的促进伤口愈合和皮肤修复的功效作用，它能使皮肤瘢痕成纤维细胞增殖抑制减少细胞外基质合成，刺激纤维母细胞增生，良好的诱导细胞凋零阻断剂，降低氧自由基浓度，明显抗菌减少炎症，促进疤痕表皮再生修复，淡化色素(促进黑素细胞凋亡，抑制黑素合成)、促进细胞再生，恢复皮肤弹性与光泽。

积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。目前认为，积雪草的主要活性成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖苷组成，包括积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷，它们都具有五环三萜结构和糖苷支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。积雪草中起效的功效为积雪草苷和羟基积雪苷含量，研究表明，羟基积雪草苷所发挥的功效显著强于积雪草苷。

CN101724006A公开了一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括：将原料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液或通入模拟移动床色谱系统，用含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液洗脱得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料；将二次固体料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷-B。然而，该方法从含积雪草总苷的原料出发，采用模拟移动床色谱系统，其操作复杂，对设备要求高，且使用甲基叔丁基醚，具有一定的毒性和危险性，在储存和使用过程中都需要充分重视。

CN102477063公开了制备型高效液相色谱仪分离积雪草提取物中的积雪草苷B与羟基积雪草苷的方法，在流动相内添加环糊精，再用有机溶剂萃取去除溶剂中的环糊精得到纯品，该方法操作复杂，添加β-环糊精的溶剂容易造成色谱柱堵塞，降低色谱柱的使用寿命，成本高，不易工业化生产。CN102532244A公开了制备高纯度积雪草苷的方法，通过萃取、脱色、重结晶的方法得到积雪草苷纯品，但工艺中采用多种有机溶剂对积雪草提取物浸膏进行萃取，有机溶剂用量多，容易造成二次污染。CN101948501A公开了一种羟基积雪草苷的制备方法，提取液经大孔树脂柱层、活性炭脱色、析晶、大孔树脂再层析，最后得到98％以上纯度羟基积雪草苷，该工艺周期长，工艺复杂，成本高。

以上几种方法均是通过提取的方法来制得羟基积雪草苷，周期长，工艺复杂，成本高。

由于积雪草中各成分性质的复杂性和特殊性，尤其是积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的结构及理化性质都较为接近，其中羟基积雪草苷和积雪草苷B是一对同分异构体，它们和积雪草苷相比只多了一个羟基，而强极性糖元的连接又大大地弱化了这种微小极性的差异，使得很难用常规的分离方法将这三种物质完全分离。现有技术要么多数是从积雪草总苷出发制备上述三种化合物，要么是从积雪草出发制备分离其中的一种或两种化合物。而使用微生物发酵积雪草，通过其生物转化得到羟基积雪草苷目前未见有报道。

发明内容