[发明专利]一种同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器

权利要求书

1.一种同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，包括磁珠探针和四种捕获分子，所述磁珠探针是在磁珠表面依次修饰有HER2、ER、PR和Ki67四种蛋白的抗体；所述四种捕获分子是在二氧化硅球表面分别修饰四种不同的金属离子以及对应的四种蛋白的抗体，所述二氧化硅球表面吸附的金属离子为Cd^{2 +}，修饰的抗体为HER2抗体，得到的捕获分子用于捕获和识别HER2；所述二氧化硅球表面吸附的金属离子为Cu^{2 +}，修饰的抗体为Ki67抗体，得到的捕获分子用于捕获和识别Ki67；所述二氧化硅球表面吸附的金属离子为Pb^{2 +} ，修饰的抗体为ER抗体，得到的捕获分子用于捕获和识别ER；所述二氧化硅球表面吸附的金属离子为Hg²⁺，修饰的抗体为PR抗体，得到的捕获分子用于捕获和识别PR。

2.根据权利要求1所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述磁珠探针采用以下方法制得：将MB-COOHs加入含有EDC和sulfo-NHS的MES缓冲液中，在室温下活化30~60min，离心后，用PBS缓冲液洗涤，得到活化的MB-COOHs，再将活化的MB-COOHs分别加入含有HER2、ER、PR和Ki67的抗体溶液中，并在30℃下继续孵育0.5~2h，离心后，用BSA溶液封闭未反应的基团，并用PBS缓冲液洗涤，即得到所述磁珠探针。

3.根据权利要求2所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述MB-COOHs与MES缓冲液的质量体积比为0.1~2mg:1ml；MES缓冲液中EDC和sulfo-NHS的质量比为0.5~6:2~14。

4.根据权利要求2所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述抗体溶液的浓度为1ng/mL~1μg/mL。

5.根据权利要求1所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述捕获分子采用以下方法制得：

S1：在蒸馏水、乙醇和氨水构成的混合溶液中加入TEOS，混合均匀后，再在室温下充分搅拌后，用无水乙醇多次离心清洗，得到二氧化硅球；

S2：将步骤S1得到的二氧化硅球加入到乙醇溶液中，超声分散得到均匀的二氧化硅球混合溶液，然后将APTES滴加到所述混合溶液中搅拌0.5~9h，离心分离，得到的沉淀用乙醇溶液清洗，得到氨基化二氧化硅球；

S3：将氨基化二氧化硅球分别加入到含有Cd^{2 +}、Cu^{2 +}、Pb^{2 +} 和Hg²⁺的金属离子溶液中，并在30℃下摇荡0.2~6h，待吸附平衡后，离心洗涤，得到四种金属离子-二氧化硅；

S4：将EDC分别与含有HER2、ER、PR和Ki67四种抗体的PBS溶液混合，室温搅拌30 min得到活性酯中间体溶液，然后加入NHS和步骤S3得到的对应的金属离子-二氧化硅，不断搅拌，0~7℃孵育3~16 h，得到四种二氧化硅-金属离子-抗体即捕获分子。

6.根据权利要求5所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述混合溶液中蒸馏水、乙醇和氨水的体积比为28~25：65~60：7~1。

7.根据权利要求5所述同时检测乳腺癌四种标志物的原位电化学免疫传感器，其特征在于，所述金属溶液浓度为1~40mg/mL。

8.如权利要求1~7任一项所述原位电化学免疫传感器在乳腺癌分子分型检测中的应用。