[发明专利]一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法

说明书

本发明涉及一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，属于烟气毒性分析技术领域。本发明的提取方法包括以下步骤：1)抽吸加热卷烟时采用滤片捕集烟气总粒相物，采用DPBS缓冲液吸收穿过滤片的烟气气相物；每个滤片对应的抽吸口数为35‑45口且对应采用的缓冲液体积为V₁，V₁为2‑3.75mL；2)采用DMSO对捕集的烟气总粒相物进行萃取，将萃取液与吸收后的缓冲溶液混合；每个滤片对应采用的DMSO体积为V₂，V₂为2‑3.0mL且V₂≤V₁。该方法能够充分获取加热卷烟烟气提取物，并获得较高浓度的全烟气提取物母液，用于体外毒性测试时可以获得较大细胞毒性响应范围，从而较好的评估加热卷烟的体外毒性情况。

技术领域

本发明涉及一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，属于烟气毒性分析技术领域。

背景技术

加热卷烟(又被称为加热不燃烧卷烟、电加热卷烟或加热烟草制品)是一类为降低烟气健康风险研发的新型烟草制品。该类产品主要通过控制温度使烟叶在非燃烧状态下释放烟气供消费者使用。由于其具有低危害和类似于可燃卷烟的口感、尼古丁输送等特性，日渐受到消费者青睐。研究发现，加热卷烟的“低危害”可能是由于其加热温度(不超过350℃)比传统卷烟燃烧温度低，释放出比燃烧卷烟较低的有害和潜在有害成分引起的。

卷烟烟气由粒相成分和气相成分组成。卷烟体外毒性测试全烟气提取方法：滤片收集的烟气总粒相物(TPM)用一定体积的二甲基亚砜(DMSO)萃取并定容至10mg/mL浓度的TPM的DMSO溶液，用等DMSO体积的缓冲液收集烟气气相物(GVP)，然后将TPM和GVP溶液等体积混合用于后续细胞毒性测试。在确定毒性测试剂量范围时，由于DMSO超过一定体积分数后对细胞有毒性损伤，因此，允许的最大染毒剂量通常控制在DMSO体积分数为2％以下，例如：根据这一方式，参比卷烟3R4F最大允许的染毒剂量约为388.2μg/mL，实际上，在染毒剂量约为80μg/mL下，Beas-2b细胞存活率即可达到30％左右，因此，在这种提取方法下，很容易观察到最大的Beas-2b细胞毒性响应范围，并且做到50％细胞存活率的响应浓度。

当前用于加热卷烟体外毒性测试的全烟气提取方法主要延用传统卷烟的全烟气提取方法，但是由于加热卷烟烟气有害成分较少，毒性小，在传统卷烟的全烟气提取方案下，容易造成提取母液中全烟气提取物浓度低而DMSO浓度较高，从而，无法观察到较低细胞存活率的细胞毒性响应范围，从而无法客观地评估加热卷烟的体外毒性情况。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，可以获得较大的细胞毒性响应范围。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，包括以下步骤：

1)在抽吸加热卷烟的过程中，采用滤片捕集烟气总粒相物，采用DPBS缓冲液吸收穿过滤片的烟气气相物；每1个滤片对应的抽吸口数为35-45口，且每使用1个滤片对应采用的DPBS缓冲液的体积为V₁，V₁为2-3.75mL；所述滤片为购自Borgwaldt KC GmbH的规格为直径44mm的剑桥滤片；

2)捕集结束后，采用二甲基亚砜对滤片上捕集的烟气总粒相物进行萃取，萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜与步骤1)中吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合；进行所述萃取时，每1个滤片对应采用的二甲基亚砜的体积为V₂，V₂为2-3.0mL且V₂≤V₁。