[发明专利]抗体、杂交瘤细胞株和检测猪δ冠状病毒的试剂盒

说明书

本发明提供抗体、杂交瘤细胞株和检测猪δ冠状病毒的试剂盒。所述抗体能特异性地识别并结合猪δ冠状病毒的N蛋白，优选是单克隆抗体。本发明还提供分泌抗猪δ冠状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株FL125‑29，其被保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202131。本发明另外还提供基于双抗体夹心法检测猪δ冠状病毒的ELISA定量检测试剂盒。本发明的抗体与重组猪δ冠状病毒N蛋白和天然猪δ冠状病毒N蛋白均能发生很强的特异性反应，与其他病原的蛋白成分不发生交叉反应。本发明的试剂盒最低可检出含量为0.5ng/mL的猪δ冠状病毒N蛋白，能很好地应用于对猪δ冠状病毒N蛋白进行定量检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及抗猪δ冠状病毒的抗体、分泌抗猪δ冠状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株和检测猪δ冠状病毒的试剂盒。

背景技术

猪δ冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus，PDCoV）为δ冠状病毒成员，是2012年新发现的一种感染猪的冠状病毒，临床特征是引起母猪和仔猪腹泻症状，以呕吐、水样腹泻、脱水和食欲下降为基本特征，发病仔猪中的死亡率为 30%~40%。

此前，对PDCoV病原的检测多用常规的RT-PCR或RT-qPCR核酸检测方法，操作繁杂、耗时长、成本较高、检测过程易污染，且RT-PCR不能定量检测、只能定性判断，且不能高通量检测。

发明内容

本发明一方面旨在提供抗猪δ冠状病毒的抗体，所述抗猪δ冠状病毒的抗体能特异性地识别并结合所述猪δ冠状病毒的N蛋白。

优选地，所述抗猪δ冠状病毒的抗体是单克隆抗体。

优选地，所述单克隆抗体由2021年2月2日保藏在位于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心、保藏编号为CCTCC NO:C202131的杂交瘤细胞株FL125-29分泌。

本发明还提供分泌抗猪δ冠状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株FL125-29，该细胞株于2021年2月2日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202131。

本发明还提供上述抗猪δ冠状病毒的单克隆抗体在制备检测猪δ冠状病毒的试剂中的应用。

本发明还提供一种检测猪δ冠状病毒的试剂盒，其包括酶标板，所述酶标板的各反应孔内预包被有抗猪δ冠状病毒的抗体，所述试剂盒还包括检测抗体。

优选地，所述检测抗体是抗猪δ冠状病毒N蛋白的多克隆抗体。

优选地，所述抗猪δ冠状病毒的抗体是由2021年2月2日保藏在位于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心、保藏编号为CCTCC NO:C202131的杂交瘤细胞株FL125-29分泌的单克隆抗体。

优选地，所述检测抗体选自兔抗猪δ冠状病毒N蛋白的多克隆抗体或羊抗猪δ冠状病毒N蛋白的多克隆抗体。

优选地，所述试剂盒还包括酶标抗体工作液、标准品冻干粉、样品处理液、显色剂、终止液和洗涤液。

本发明提供的抗猪δ冠状病毒的抗体与重组猪δ冠状病毒N蛋白和临床病料中的天然猪δ冠状病毒N蛋白均能发生很强的特异性反应，而与其他病原的蛋白成分不发生交叉反应。基于该抗猪δ冠状病毒的抗体制备的试剂盒最低可检出含量为0.5 ng/mL的猪δ冠状病毒N蛋白，能很好地应用于对被检样品中猪δ冠状病毒N蛋白进行定量检测，进而反映出被检样品中猪δ冠状病毒的水平。

本发明所制备的试剂盒具有特异性好、灵敏度高、重复性好、稳定性好，操作简便、快速等优点，适合用于高通量临床病原诊断、弱毒活疫苗的质量控制等应用实践，对猪δ冠状病毒的防控具有重要意义。

序列表

110 江苏省农业科学院

120 抗体、杂交瘤细胞株和检测猪δ冠状病毒的试剂盒

130 JAAS2021-1