[发明专利]一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法

权利要求书

1.一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法，其特征在于，所述细胞培养方法以CHO细胞为表达系统，在补料过程中添加半乳糖、尿嘧啶核苷和四水氯化锰。

2.根据权利要求1所述的方法，所述CHO细胞选自CHO-S、CHO-K1、CHO-GS或CHO-DG44细胞；优选地，所述CHO细胞为CHO-K1细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述半乳糖添加总量为3.30-9.40g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为0.92-2.60g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为1.48-4.20mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为3.45-9.20g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为0.94-2.51g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为1.51-4.03mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为5.18-9.20g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为1.41-2.51g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为2.27-4.03mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为3.45g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为0.94g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为1.51mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为5.18g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为1.41g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为2.27mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为6.90g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为1.88g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为3.02mg/kg初始培养液；

优选地，所述半乳糖添加总量为9.20g/kg初始培养液，尿嘧啶核苷添加总量为2.51g/kg初始培养液、四水氯化锰添加总量为4.03mg/kg初始培养液。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述的细胞培养方法包括以下步骤：

a)将基础培养基加入摇瓶或细胞反应器中，接种细胞进行培养；

b)将所述半乳糖、尿嘧啶核苷和四水氯化锰均分成五等份，分别在培养的第3、5、7、9、11天加入，并添加补料培养基；

c)培养至第5天降温到33.0℃，维持这一温度继续培养至第13-15天结束；

所述方法能使收获的抗体糖基化水平提高至少199％；

优选地，所述方法能使收获的抗体糖基化水平提高218％；

优选地，所述方法能使收获的抗体糖基化水平提高227％；

优选地，所述方法能使收获的抗体糖基化水平提高232％。

5.根据权利要求4所述的方法，所述补料培养基为一种或多种组合。

6.根据权利要求4所述的方法，所述抗体为单特异性抗体或双特异性抗体或多特异性抗体。

7.根据权利要求4所述的方法，所述抗体为单克隆抗体。

8.根据权利要求7所述的方法，所述单克隆抗体为抗CD20单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述的方法，所述抗CD20单克隆抗体包含重链可变区VH和轻链可变区VL，其中所述VH包含互补决定区域HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述的HCDR1包含SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列、HCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列和HCDR3包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；其中所述VL包含互补决定区域LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述的LCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列、LCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列和LCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。

10.根据权利要求9所述的方法，所述抗CD20单克隆抗体为利妥昔单抗。