[发明专利]一种弥漫大B细胞淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种弥漫大B细胞淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种。本发明基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫图谱文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定弥漫大B细胞淋巴瘤外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有弥漫大B细胞淋巴瘤。本发明能够同时比较巨大数量的弥漫大B细胞淋巴瘤特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种弥漫大B细胞淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术

非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphoma，NHL)是一组起源于淋巴结和淋巴组织的恶性肿瘤的总称，NHL病变是主要发生在淋巴结、脾脏、胸腺等淋巴器官，也可发生在淋巴结外的淋巴组织和器官的淋巴造血系统的恶性肿瘤。依据细胞来源将其分为三种基本类型：B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL。

流行病学显示，我国非霍奇金淋巴瘤患者相对较少，但近年来发病率逐渐上升。最近的一项调查显示，非霍奇金淋巴瘤占每年新发肿瘤的4％，占所有恶性淋巴瘤的90％，全国每年约有54000人被诊断为非霍奇金淋巴瘤，每年死亡人数约19000人。该病发病率随年龄的增长而显著上升，男性患者比女性多见。

弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse Large B-Cell Lymphoma，DLBCL)是NHL中最常见的类型，在临床上最常见的病理学类型、最具代表性的侵袭性淋巴瘤。DLBCL是肿瘤性大B淋巴细胞呈弥漫性生长，肿瘤细胞的核与正常组织细胞的核大小相近或大于组织细胞的核，通常大于正常淋巴细胞的2倍。该癌种可发生于任何年龄段，但常见于老年人，几乎全身任何部位均可发生弥漫性大B细胞淋巴瘤。其发病率占非霍奇金淋巴瘤(NHL)的31％～34％，在亚洲国家一般大于40％。我国2011年一项由24个中心联合进行、共收集10 002例病例样本的分析报告指出，在中国DLBCL占所有NHL的45.8％，占所有淋巴瘤的40.1％。

非霍奇金淋巴瘤的病因和发病机制目前尚未完全清楚，一般认为其与感染、免疫状态、环境和饮食等危险因素相关。在这些危险因素影响下，可引起B细胞和T细胞内癌症基因的激活及肿瘤抑制基因的失活，使淋巴细胞增殖失控，最终形成非霍奇金淋巴瘤。

淋巴瘤生存率相对较高，在规范化综合治疗的情况下，淋巴瘤治愈率可超过60％，其中霍奇金氏淋巴瘤治愈率为70％-90％，50％的非霍奇金氏淋巴瘤患者可获得长期生存。但根据《柳叶刀》2018统计数据，我国淋巴瘤患者的5年生存率约为38.3％，相比日本和美国的57.3％，68.1％，仍存在明显差距。原因有好几个。首先是与诊断的准确性有关，不同亚型的确定治疗方案不同。组织学亚型是决定患者临床表现、预后和治疗的主要因素。2019淋巴瘤白皮书数据显示，参与调研的患者中，约43％患者曾有过误诊经历，51％的患者辗转多家医院后方得以确诊。患者从初次诊断到最终确定所患亚型，平均耗费时长为2.5个月，而一些亚型患者确诊所需等待时间更为漫长。同时，调研表明，大部分患者为了确诊，需奔赴北上广等医疗资源集中的大城市；其次是患者的就诊意识较低。很多患者前来就诊时就已经是晚期，治疗效果肯定不如早期。所以早诊断、早治疗，是提高淋巴瘤治疗效果，改善患者预后，节约社会资源的迫切需求。

弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断检查可分为创伤性和非创伤性检查。创伤性检查多是取组织细胞学标本为诊断而进行，非创伤性检查多是为寻找病变位置、评估病变范围和评估治疗疗效而进行。

1、创伤性检查

主要根据病变的大小、生长的部位和创伤检查可能带来的风险而决定操作的方式。

浅表肿大淋巴结直接穿刺；或在超声、CT定位引导下经皮进行深部淋巴结及占位病变穿刺针吸细胞获取标本。此种方法价值存在一定的争议。