[发明专利]一种血清CENPF抗体（IgG和IgM）检测胶体金试纸条

说明书

本发明涉及一种胶体金试纸条，可同时对两种血清CENPF自身抗体(IgG抗体和IgM抗体)进行定性或半定量检测。本检测试纸条通过胶体金反应，能够快速定性或半定量检测血清中CENPF抗体含量，可用于早期肝细胞癌的快速筛查。本胶体金试纸条提供了一种新的肝细胞癌CENPF自身抗体检测方法，检测CENPF抗体灵敏度约为4.1ng/mL，检测时间10‑15分钟，操作简捷易行，结果直观可见，适用于早期肝细胞癌的快速筛查。

技术领域

本发明涉及一种血清CENPF抗体(IgG和IgM)检测胶体金试纸条。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是原发性肝癌的主要类型。肝癌的发病率和死亡率分居全球癌症发病和死亡的第6位和第4位，由于HCC缺乏早期症状，大部分病人出现症状时已属中晚期，失去有效治疗的机会。通过早期诊断发现HCC后，采取切除术或肝移植，患者5年生存率通常在60-70％以上。因此，早期诊断在临床中可以为患者争取手术治疗的时间，在提高生存率、改善预后方面起到了不可替代的作用。但目前临床上仍缺乏敏感度高、特异性好，且具有临床可操作性的HCC筛查及早期诊断方法。在临床的各类检测方法中，超声、MRI及CT等检查方式虽然能够在一定程度上检测出肝癌病变的情况，但对于一些良性肝癌恶化、癌变组织转移等情况难以作出合理的预测。比较而言，通过检测病人血清标志物实现HCC的早期诊断无疑具有独特的优势和很强的可操作性。

目前已用于HCC临床诊断的血清标志物主要为甲胎蛋白(AFP)、AFP异构体(AFP-L3)、异常凝血酶原(DCP)、高尔基体糖蛋白73、γ-谷氨酰转肽酶 (GGT)、转化生长因子β1(TGF-β1)等，均不同程度存在检测敏感度或特异性低的问题，假阳性率较高，所以临床上常与其他诊断指标联合使用。近年来，随着以蛋白质双向电泳、新型质谱分析为主的蛋白质组学方法的应用，为寻找新型HCC标志物提供了强有利的工具，已报导筛选出一些新的潜在血清标志物。但总体说来，目前已有的或已报道的血清标志物大都距HCC的早期临床诊断实际应用较远。

近年来的研究发现，当肿瘤相关抗原水平很低，利用常规蛋白检测方法无法检测到时，免疫系统就能监测到该特异蛋白的存在，从而引发免疫反应产生大量的抗体。因此自身抗体检测方法与抗原检测方法相比具有更高的敏感度，血清自身抗体有可能成为用于癌症早期诊断的非常有前景的标志物。本课题组前期研究发现血清着丝粒蛋白F(CENPF)自身抗体区分HCC和非HCC的价值最高，差别有统计学意义。检测早期HCC的AUC值为0.826，高于AFP的0.749，敏感度达76.2％，远远高于AFP的49.5％，且自身抗体水平显著高于其他类型的肿瘤，特别值得一提的是AFP阴性的早期HCC患者有73.6％是CENP-F自身抗体阳性，值得注意的是，与AFP抗原的阳性率随着肿瘤的进展而升高不同， CENPF自身抗体的阳性率一般在肿瘤早期较高，然后随着肿瘤的进展而下降。

人体识别肿瘤相关抗原为外来抗原从而触发免疫反应，从而通过先天免疫系统进行消除。但其中部分恶性细胞未被消除从而得以存活，因此通常需要二次免疫反应，其中便产生IgG和IgM自身抗体。IgM是机体第一道防线的一部分，负责识别和清除感染颗粒并清除转化细胞，用于识别肿瘤相关抗原。有研究显示，一些IgM抗体已经从患者的肿瘤中分离出来，其在体内与细胞表面受体结合，诱导细胞凋亡来消除肿瘤。且IgM抗体已被证实在人类上皮细胞肿瘤的免疫监测机制中发挥重要作用。免疫反应产生的第一种免疫球蛋白是IgM，所以可将其作为一种早期诊断工具。IgM相对于IgG，在体内产生时间更早，含量变化却与IgG相当。IgG有时会受到免疫调节影响，表现为免疫抑制，而IgM则不会。遂将IgG和IgM结合检测，共同作为HCC早期诊断的诊断分子至关重要。

此外，现有技术检测着丝粒蛋白F(CENPF)自身抗体往往采用的是间接 ELISA法，不但检测过程复杂检测周期长，且往往结果非特异性强，重复性差，若用于大量临床样本筛查检测时，工作量极大，效率低，不便于大规模的早期病例筛查。本试纸条检测速度快(10-15分钟)，过程简便，结果直观且准确度高。