[发明专利]一种利用外泌体改善弱精症精子功能的方法

权利要求书

1.一种利用外泌体改善弱精症精子功能的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，正常人精浆外泌体的分离：收集正常可育精液，12000 g离心10 min，去掉细胞和杂质，依次用0.45 μm和0.22 μm的微孔滤膜过滤精浆，去掉细胞碎片及大分子聚集物杂质，将2.5 mL的上清加入300 μL 含有20 mM Tris、30 wt.% 蔗糖和氧化氘的蔗糖垫溶液中100000 g、4℃超速离心90 min，收集上层清液在含有20 mM Tris、25 wt.% 蔗糖和氧化氘的的蔗糖垫溶液中100000 g、4℃超速离心5 h，将两次离心得到的外泌体混合后用HS溶液清洗一遍，将得到的外泌体用HS溶液溶解，调整为生理浓度的10倍后保存于-80℃备用；

步骤2，弱精症精子的筛选与前处理：将当天收集到的患者精液样本置于37℃恒温水浴中液化 60 min，吹打混匀，取10 µL液化后的精液，利用计算机辅助精液分析仪分析人精子的各项参数，筛选满足对弱精症的诊断参数要求的样本，并染色排除精子形态显著异常的样本；

步骤3，外泌体对弱精症精子的干预：用HS清洗弱精症精子两遍，每次1000 g、5 min，加入精液体积90%的HS溶液或HTF溶液重悬精子，然后加入精液体积10%的外泌体，37℃ 孵育10 min，即可。

2.根据权利要求1所述的利用精浆外泌体改善人精子功能的方法，其特征在于：步骤2中满足对弱精症的诊断参数要求的样本是指精子前向运动精子活力32%的样本。