[发明专利]一种胃蛋白酶原I酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种胃蛋白酶原I酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用。该试剂盒包括标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物的溶液、标记有PGI抗体的酶标结合物的溶液及底物液。该试剂盒是将胃蛋白酶原抗体连接在磁珠微球表面作为固相试剂，经捕捉样本中的胃蛋白酶原以及加入酶标抗胃蛋白酶原单克隆抗体试剂后，形成酶标抗体夹心免疫复合物。本发明的优点在于将高灵敏的化学发光技术与稳定性强的磁微粒技术结合在一起，制备的试剂盒灵敏度高，稳定性好，能够满足临床要求；同时整个反应检测过程可以配套使用全自动检测分析仪器，连续加样，缩短了操作时间，可用于大规模的社区健康检查，具有一定的应用前景。

技术领域

本发明属于诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种胃蛋白酶原I酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

近年来，胃癌的发病率呈上升趋势，这主要归因于人们生活方式和饮食的改变。目前胃癌和其他胃部疾病的诊断仍依靠胃镜和组织病理学来确诊，但胃镜检查有一定痛苦，往往不为患者所接受，容易导致延误诊断和治疗。同时，大多数情况下直到胃癌达到晚期才可以诊断为胃癌。

胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶(蛋白水解酶)的无活性前体，为一由375个氨基酸组成的蛋白多肽链，平均相对分子质量为42000，人胃黏膜中有7组胃蛋白酶同工酶原。分为PGI、PGII两个亚群，PGI主要由胃腺的主细胞的黏液颈细胞分泌；PGII，除由胃体和胃底粘膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGⅡ,胃黏膜合成的PGⅡ约为总量的25％。胃蛋白酶原I(PGI)作为胃蛋白酶的失活前体，是胃粘膜炎症的重要指标之一。PGI的水平可以反映胃黏膜的形态和功能状态。研究发现胃癌患者的PGI将显着降低。与常规内窥镜检查相比，PGI水平的测量可为大规模筛查胃癌提供一种无创且方便的方法。

迄今为止，已开发出许多检测PGI的方法，包括酶联免疫吸附测定(ELISA)，放射免疫测定(RIA)，时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)，电化学发光免疫测定(ECLIA)和直接化学发光免疫测定(dCLIA)。但是，ELISA耗时且重现性差，不能用于高通量检测，RIA检测方法具有放射性，容易造成环境污染，仪器和试剂成本的ECLIA和dCLIA高，导致无法使用适用于在资源有限的地区进行大规模的健康检查。

而目前存在的PGI检测试剂盒测定需要较长的测试时间，大多为半自动测试，易造成样本污染，不能连续加样测试，并且存放时间受环境条件影响较大，长期存放的稳定性差，灵敏度差。

发明内容

为克服现有技术的上述不足，本发明提供了一种胃蛋白酶原I酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用。该胃蛋白酶原I(PGI)检测试剂盒，即开即用，无需配制，测量重复性好，灵敏度高，并且可长时间存放，可实现全自动加样，且样本用量少，节省样本。

本发明的目的至少通过如下技术方案之一实现。

本发明提供的胃蛋白酶原I测定试剂盒，包括：

标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物的溶液、标记有PGI抗体的酶标结合物的溶液及底物液。

进一步地，所述标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物为磁微粒与PGI抗体的结合物；所述磁微粒的直径为1000-2000纳米；在所述标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物的溶液中，所述标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物的浓度为3-5μg/mL。所述标记有PGI单克隆抗体的磁性微球结合物是由直径为1000-2000纳米的活化的磁微粒与PGI抗体洗涤、连接、封闭、稀释制备得到。

进一步地，所述标记有PGI抗体的酶标结合物为碱性磷酸酶与PGI抗体的结合物；在标记有PGI抗体的酶标结合物的溶液中，所述标记有PGI抗体的酶标结合物的浓度为0.4-0.6μg/mL。

进一步地，所述底物液为AMPDD底物液；所述底物液的生产厂家为万孚生物技术有限公司。