[发明专利]一种筛选葡萄糖抑制型耐氧己酸菌的培养基及其应用

说明书

本发明属于微生物及酿酒领域，公开了一种筛选葡萄糖抑制型耐氧己酸菌的培养基，所述培养基包括富集培养基和发酵培养基，所述培养基由葡萄糖0‑15份、酵母膏15‑20份、复合营养物3‑10份、乙酸钠3‑7份、乙醇20‑25份、碳酸钙7‑14份、水1000份，该培养基在筛选己酸菌时进行调节培养基成分，即当富集己酸菌数量时添加适量葡萄糖成分，当己酸菌数量足够时，不添加葡萄糖的培养基有助于己酸菌快速产酸，制得固体培养基时需添加相应份数的琼脂，本发明提供的一种筛选葡萄糖抑制型己酸菌的培养基，所述培养基中添加了相应的碳源以及有益于己酸菌生长的物质，不仅提高了己酸菌筛选效率，而且缩短了己酸菌筛选周期，减少了工作量。

技术领域

本发明涉及一种筛选葡萄糖抑制型耐氧己酸菌的培养基及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

己酸产自窖泥中的己酸菌，己酸菌，并没有严格意义的分类学上的意义，指一类能产己酸的细菌。己酸菌是浓香型白酒生产中非常重要的产酸微生物，由它代谢产生的己酸与大曲发酵产生的乙醇发生反应生成己酸乙酯，而己酸乙酯作为我国传统香型白酒之一的浓香型白酒的主体风味物质，具有窖香浓郁、香味协调等特性。己酸菌培养液可广泛应用于浓香型大曲酒的灌窖、窖池保养、人工窖泥培养、酯化液的制作等，以改善和提高浓香型大曲酒的质量。首株己酸菌Clostridiumkluyveri(克卢维尔梭菌，即克氏梭菌)于1937年由巴克尔发现，其主要产生己酸和丁酸，同时还生成少量乙酸，该菌株视为己酸菌的模式菌株。目前已报道的己酸菌多属于专性厌氧的梭菌，梭菌纲微生物分布较广，包括克氏梭菌、粪味梭菌、深红红螺菌、粘液真杆菌和艾氏巨型球菌等，被认为是影响窖泥质量的重要功能菌群，目前己酸菌的生产周期是一周左右，三天至四天时，培养液产气旺盛、菌种健壮活跃，一周后停止产气，进入静止期，八至十天时产酸达最大。

上世纪60年代，我国开展了研究浓香型酒与窖泥微生物的关系，发现窖池中长着大量的梭状芽孢杆菌，而窖池中栖息的己酸菌就是窖池发酵生香的一种主要功能菌，将该己酸菌筛选培养后能够产生己酸，窖泥中己酸菌的含量高低影响着窖泥质量的好坏。人们为了“增己降乳”以及“抑制乙酸乙酯的偏高”的目标，对己酸菌的发现、纯培养和开发利用投入了极大的热情。目前研究中，人们分离出的己酸菌主要是以乙醇为碳源的己酸菌和以乳酸为碳源的己酸菌。

根据生产实践经验，若在酒醅入窖时便加入含大量己酸的己酸菌液将不利于淀粉糖化发酵，使出酒率下降。而葡萄糖抑制型耐氧己酸菌高葡萄糖抑制产己酸的性质可保证其在白酒生产中，在葡萄糖等碳源存在的情况下快速生长，但不产己酸，在葡萄糖基本被消耗掉再开始产己酸，可保证发酵的正常进行，不影响出酒率，发酵结束后可以反应生成大量的己酸乙酯，有助于提高酒质。

己酸菌的产酸能力直接影响酯化效果，所以提高酯的含量首要是提高己酸含量。因此己酸菌的产酸能力与培养基成分有很大的关系，己酸菌在培养易发生氨细菌污染，使发酵液发黑、恶臭，己酸产量大幅度下降，为了避免这种情况，在培养时可加大接种量。因此寻求一种选择合适的培养基及合理的工艺方法可以提高己酸菌的产酸能力。

当前研究中己酸菌的分离与培养主要采用乙醇乙酸钠(ES)培养基，培养基各成分含量略有不同，主要包括乙醇、乙酸钠、酵母膏、碳酸钙以及MgSO₄·7H₂O、K₂HPO₄、(NH₄)₂SO₄这些无机盐。虽然ES培养基为当前研究中最常见的己酸菌培养基，但此培养基不利于己酸菌菌数的增加，在分离筛选己酸菌时需要经过多次富集后才能筛选出己酸菌，较为繁琐。在人工培养己酸菌液时也不易得到大量己酸菌菌体。

发明内容

针对如何高效快速筛选己酸菌的问题，本发明提供一种高效特异性强的己酸菌筛选培养基及其应用。

本发明采用以下技术方案：

本发明公开一种筛选葡萄糖抑制型耐氧己酸菌的培养基，包括富集培养基和发酵培养基。