[发明专利]一株分泌醚菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌醚菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌醚菌酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株AE，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年4月23日，保藏编号CGMCC No.19680。将醚菌酯的完全抗原免疫BALB/c小鼠，将高效价、低IC₅₀小鼠的脾细胞，通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，采用选择培养基，筛选出两种细胞融合后的杂交细胞；再经间接竞争酶联免疫法筛选细胞并三次亚克隆，最终得到一株杂交瘤细胞株AE。AE分泌的单克隆抗体，对醚菌酯具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为0.5ng/mL)，为食品中醚菌酯残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株分泌醚菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

醚菌酯(kresoxim-methyl)又称(E)-2-甲氧亚氨基-[2-(邻甲基苯氧基甲基)苯基]乙酸甲酯，是一种高效、广谱、新型甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂。对草莓白粉病、甜瓜白粉病、黄瓜白粉病、梨黑星病、葡萄白腐病等病害具有良好的防效。它能控制治疗子囊菌纲、担子菌纲、半知菌纲、卵菌纲等大多数病害。对孢子萌发及叶内菌丝体的生长有很强的抑制作用，具有保护、治疗和铲除活性。有很好的渗透性及局部内吸活性，持效期长，被广泛用于防治果树类、蔬菜类、茶树、烟草等作物上的病害。由于醚菌酯具有高效广谱的杀菌活性，可一次性或多次用于蔬菜、果树及禾谷类作物；若乱用、滥用或使用不当，药物可能通过食物链传递到人群，对人体的健康产生潜在风险。

因此，《GB 2763—2019食品中农药最大残留限量》中规定了醚菌酯在各种食品中的最大残留限量标准(MRL)，如其在糙米中的MRL为0.1mg/kg，在黄瓜中的MRL为0.5mg/kg，在苹果和梨中的MRL均为0.2mg/kg，在葡萄干中的MRL为2mg/kg，以及在草莓中的MRL为1mg/kg。

为了有效监督监测醚菌酯的使用情况，防止药物的不规范使用，有必要开发一种高灵敏度、高特异性的检测方法，而目前检测方法如高效液相色谱法、高效液相色谱串联质谱法等仪器检测方法，其样品前处理过程极为复杂、成本昂贵，并且仪器方法并不适用于现场检测。免疫学检测方法是一种低成本、快速且高灵敏度高特异性的检测方法，而且操作简便、成本低，已广泛适用于药物残留检测领域。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是其重要前提。

发明内容

本发明的目的是在于提供一株醚菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该细胞株制备的抗体对醚菌酯具有较高的检测灵敏度，可以用来建立醚菌酯的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株分泌醚菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株AE，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年4月23日，保藏编号CGMCC No.19680。

醚菌酯单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.19680的杂交瘤细胞株AE分泌产生。

醚菌酯半抗原，结构简式如下：

醚菌酯半抗原的制备方法：称取2-(2-甲基苯氧甲基)苯甲酰甲酸甲酯，溶于甲醇、水和吡啶的混合溶液中，加入羧甲基羟胺半盐酸盐，水浴持续搅拌反应后，取出，室温条件下避光过夜；随后，氮吹，加入三氯甲烷溶解，再加入纯水萃取三次，除去上层水相后，下层有机相经氮气吹干后，得到醚菌酯半抗原。