[发明专利]一种检测宫颈高级别病变及宫颈癌相关基因甲基化的引物和探针组合

权利要求书

1.一种用于宫颈高级别病变及宫颈癌检测的引物和探针，由检测人EPB41L3基因425、427、438位点甲基化的特异性引物，病毒HPV16L1基因 6367、6389位点甲基化的特异性引物和HPV18L2 基因4256、4261、4265、4269、4275和4282位点甲基化的特异性引物及各自的内参基因引物以及标记有荧光基团的探针组成，其特征在于：

所述EPB41L3 内参基因选自ACTB，HPV16 内参基因选自HPV16E1和HPV16L1，HPV18 内参基因选自HPV18E1和HPV18L2，

所述的引物和探针包括：

EPB41L3引物对1：SEQ ID No：1 所示的EPB41L3正向引物1，SEQ ID No：2所示的EPB41L3反向引物1；

EPB41L3基因的探针如SEQ ID No：3所示；

HPV16L1引物对1：SEQ ID No：10 所示的HPV16L1正向引物1，SEQ ID No：11所示的HPV16L1反向引物1；

HPV16L1 基因的探针如 SEQ ID No：12所示；HPV18L2引物对1：SEQ ID No：19所示的HPV18L2正向引物1，SEQ ID No：20所示的 HPV18L2 反向引物 1；

HPV18L2基因的探针如 SEQ ID No：21所示；

ACTB 引物对1：SEQ ID No：28 所示的ACTB正向引物1，SEQ ID No：29所示的ACTB反向引物1；

ACTB 基因的探针如SEQ ID No：30所示；

HPV16 内参引物对1：SEQ ID No：33所示的HPV16内参正向引物1，SEQ ID No：34所示的HPV16 内参反向引物1；

HPV16内参探针如SEQ ID No：35所示；

HPV18内参引物对1：SEQ ID No：45所示的HPV18内参正向引物1，SEQ ID No：46所示的HPV18 内参反向引物1；

HPV18内参探针如SEQ ID No：47所示。

2.如权利要求 1 所述的引物和探针，其特征在于所述 EPB41L3基因的探针、HPV16L1基因的探针和HPV18L2基因的探针及各自的内参基因探针的5’端发光基团相同或不同，选自FAM、HEX、ROX、JOE、VIC、TET、NED、FITC、CY3或CY5；3’端淬灭基团相同或不同选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA、Eclipse、DABCYL。

3.权利要求 1或2所述的引物和探针在制备宫颈高级别病变及宫颈癌诊断试剂中的应用。

4.一种用于宫颈高级别病变及宫颈癌检测的诊断试剂或试剂盒，其特征在于包括权利要求1或2所述的引物和探针。

5.如权利要求 4所述的诊断试剂或试剂盒，其特征在于还包括甲基化特异性荧光定量PCR反应液和热启动酶。

6.如权利要求 5所述的诊断试剂或试剂盒，其特征在于所述甲基化特异性荧光定量PCR反应液包括PCR反应液1和PCR反应液2，PCR反应液1用于扩增甲基化的EPB41L3，PCR 反应液2用于扩增甲基化的HPV16L1和HPV18L2。