[发明专利]一种以瓦布贝母鳞茎盘为外植体的鳞茎增殖培养的方法有效
申请号: | 202110292346.3 | 申请日: | 2021-03-18 |
公开(公告)号: | CN112931210B | 公开(公告)日: | 2022-06-21 |
发明(设计)人: | 王跃华;林良科 | 申请(专利权)人: | 四川迪菲特药业有限公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 成都创新引擎知识产权代理有限公司 51249 | 代理人: | 柴越 |
地址: | 611930 四川省成*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 贝母 鳞茎 外植体 增殖 培养 方法 | ||
本发明公开了一种以瓦布贝母鳞茎盘为外植体的鳞茎增殖培养的方法,该方法包括外植体的选取和消毒处理、鳞茎盘再生小鳞茎培养和小鳞茎的快速生长;本发明采用的外植体是选择生长了两年的切除了根与鳞片叶的瓦布贝母鳞茎盘,经消毒处理后,按生物学生根面接触培养基的方式平放接入MS+TDZ1~3mg·L‑1+IAA0.5~1.5mg·L‑1+头孢唑林钠100~300mg·L‑1+椰子汁5%~20%的再生小鳞茎的诱导培养基,小鳞茎的快速生长培养基为B5+6‑BA1.0~2.0mg·L‑1+NAA0.5~1.5mg·L‑1+2,4‑D2.0~4.0mg·L‑1;本发明方法可大量快速生产瓦布贝母鳞茎,且培养成本低,繁殖率高。
技术领域
本发明涉及一种瓦布贝母的鳞茎快速增殖培养方法,特别是涉及一种以瓦布贝母鳞茎盘为外植体的鳞茎增殖培养的方法。
背景技术
瓦布贝母(Fritillaria wabuensis S.Y.Tang et S.C.Yue)为百合科贝母属药用植物,其干燥鳞茎为珍稀濒危药材川贝母;川贝母药材在《本草纲目拾遗》中被誉为“川贝中第一”,在1983年由唐心曜和岳松健首次报道并命名。瓦布贝母植株通常长0.5~0.8m,鳞茎扁球形,直径2~5cm,叶条状披针形或近镰形,长7~13cm,宽0.9~2cm,先端不卷曲,花黄绿色或黄色,内面具紫色斑或无斑,蒴果长3~5cm,直径1.4~1.8cm,具稜,翅狭窄,宽2mm或很狭,果梗直立。花期6月,果期7~8月。分布于四川岷江上游山区。生长在海拔2500~3000m的灌木林下。
瓦布贝母自2010年始被正式载入《中国药典》川贝母药材的基源植物之一,正逐渐成为川贝母药材的主流栽培种。瓦布贝母以干燥鳞茎入药,性苦、甘,微寒,归肺、心经,主要药效成分为生物碱和皂苷类,有清热散结、祛痰镇咳、平喘、降压、调节平滑肌和抗菌的功效,临床主要用于肺热燥咳、干咳少痰、阴虚劳嗽、咯痰带血等症候。目前随川贝母各种中成药制品的大量研发和生产,对川贝母药材的基源植物的需求量逐年增大,导致野生资源被过度开发,尤其瓦布贝母野生资源已濒临灭绝,野生商品逐渐绝迹,亟待寻求新的药材快速生产技方法。
生物组织培养技术具有生长周期短,繁殖率高,摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响,且条件均一,对植物生长极为有利,便于稳定地进行周年培养生产,因此应用组织培养的方法进行快速繁殖是解决川贝母药材资源短缺问题的有效方法之一。
发明内容
本发明目的在于提供一种以瓦布贝母鳞茎盘为外植体的鳞茎增殖培养的方法;该方法具有生产周期短、成本低和繁殖率高等特点,可在短时间内大量生产瓦布贝母的鳞茎入药部位,以缓解川贝母药材严重短缺问题。
为达到上述目的,本发明采用的解决方法包括下列步骤:
(1)外植体的选取和消毒处理:选取生长两年的瓦布贝母植物地下部分,将其根与鳞片叶切除,将保留的鳞茎盘先用质量分数为0.05%的升汞冲洗1~3min,无菌水洗2次后吸干其表面的水分;再放在超净工作台上,用体积分数为75%的酒精消毒30s,无菌水洗2~5次后;再用质量分数为0.1%的升汞消毒2~6min,无菌水洗3~5次后放在已灭菌的滤纸上吸干水分;
(2)鳞茎盘再生小鳞茎:将已消毒的瓦布贝母鳞茎盘按生物学生根面接触培养基的方式平放接入MS+TDZ1~3mg·L-1+IAA 0.5~1.5mg·L-1+头孢唑林钠100~300mg·L-1+椰子汁5%~20%的再生小鳞茎的诱导培养基中;在培养温度为10~15℃,暗培养15天后,再在每天光照5~10小时,光照强度为1000~2000lx的条件下培养;
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