[发明专利]一种孔雀石绿的检测方法

说明书

本发明涉及一种孔雀石绿的检测方法，包括将含有配合物Eu(MAA)₃Phen的试纸，在20‑35℃环境下浸入待测样品的溶液中4‑5min，取出试纸在紫外灯的照射下与标准比色卡进行对比，所述标准比色卡在紫外灯下显示出所述配合物Eu(MAA)₃Phen的红色荧光，若试纸相对所述标准比色卡红色消褪，则说明样品中含有孔雀石绿，其中，所述配合物Eu(MAA)₃Phen中，MAA为甲基丙烯酸，Phen为邻菲罗啉。本发明根据试纸片颜色的变化对比，可实现对孔雀石绿的实时、可视化、半定量检测，这种荧光试纸片便于携带，使用方法简单，可实现溶液中孔雀石绿的快速检测，为孔雀石绿的现场筛查分析和半定量检测提供了可靠的方法。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，尤其是一种孔雀石绿的检测方法。

背景技术

孔雀石绿，分子式为C23H25ClN2，是人工合成的有机化合物，是一种有毒的三苯甲烷类化学物，既是染料，也是杀真菌、杀细菌、杀寄生虫的药物，长期超量使用可致癌，无公害水产养殖领域国家明令禁止添加。

水产品中孔雀石绿的常规检测方法较为复杂，其检测所使用的仪器设备较为高端，检测时间较为漫长，例如：中国专利申请CN101566574A公开了一种水体及水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留的快速检测方法，其是将待测样品和提取剂I振荡混合均匀后，加入提取剂II振荡混合后静置，取上清液加入到富集柱中，观察富集柱中最下层的显色剂颜色变化，若形成绿色环带，则判断待测样品中含有孔雀石绿或无色孔雀石绿；提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸的混合液；提取剂II为二氧化铅和酸性氧化铝的混合物；待测样品为待检测水体样品或待检测水产品样品。上述方法采用柱层析的方式，提取静置都要花时间等待，这就导致许多企业或基层检测部门不能快速的对水产品中的孔雀石绿进行检测。

中国专利申请CN112067813A公开了一种孔雀石绿的检测试纸，包括PVC 底板、样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水垫，样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水垫由左往右依次固定设置在PVC底板的上表面，且样品垫的一端覆盖在胶体金垫的顶侧，胶体金垫在远离与样品垫连接处的一端覆盖在NC膜的顶侧，NC膜在远离与胶体金垫连接处的一端设置在吸水垫的底侧。所述NC膜上喷有检测线(T)和质控线(C)，所述检测线和质控线成分分别为BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG，且所述BSA偶联抗原的浓度0.1-0.15mg/m L，用量为0.6-0.7μL/cm，所述羊抗鼠IgG浓度为0.3-0.5mg/mL，用量为0.6-0.7μL/cm。所述胶体金垫内含有特异性单克隆抗体，且所述特异性单克隆抗体能与孔雀石绿结合。

具体的孔雀石绿的检测方法，包括以下步骤：S1：选取一定量的组织样本，并用均质器均质；S2：称取2～3gS1中均质后的组织样本，并均质于50ml的离心管中；S3：用微量移液器向离心管中加入1.5～3.0ml提取剂1，再加入8ml 丁晴和提取剂2，震荡混匀3～5分钟后，室温下4000r/min离心5min；S4：取 S3中上层待测液体3～4ml与5ml的离心管中，加入100uL氧化剂，颠倒混匀 10～15s，并于60～65℃下，利用氮气或空气将溶剂吹干；S5：向吹干的离心管中用微量移液器加入0.3～0.5mlMG复溶液和500uL正己烷，并于室温下 4000r/min离心1～3min或静止至明显分层，取下层液体150uL用于检测；S6：从原包装袋中取出试纸，并水平放置于观察者正面；S7：通过微量移液器吸取待检样品溶液70～90uL与试纸的样品垫上，并在加样后开始计时，待8～10min 后判断测试结果。

上述检测方法是目前孔雀石绿检测的主要方法，是基于竞争抑制反应原理的胶体金免疫层析技术。主要制备步骤包括胶体金的制备、胶体金标记抗体的制备、样品垫的筛选、金标垫的选择，硝酸纤维膜的制备、吸水垫的选择，试纸条的组装等，步骤繁琐，需要特定的抗原抗体，某些抗原抗体的合成现在还较困难，技术不够成熟，且试纸条的好坏很大程度上取决于原材料的质量(如氯金酸)。在室温下胶体金易出现沉淀，需在2℃-8℃条件下保存，合成质量好的胶体金较困难，在实际样品的检测中，“基质效应”会大大降低试纸条的性能。