[发明专利]一种重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种利用重组毕赤酵母基因工程菌生产木聚糖酶的方法，其特征在于，所述重组毕赤酵母基因工程菌由在原始毕赤酵母菌中过表达转录抑制因子和激活因子HSF1得到，所述原始毕赤酵母菌为毕赤酵母(Pichia Pastoris) GS115；所述转录抑制因子和激活因子HSF1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重组毕赤酵母基因工程菌通过如下方法构建得到：

（1）以毕赤酵母基因组为模板，通过PCR扩增HSF1基因片段；

（2）将步骤（1）获得的HSF1基因片段克隆到表达质粒上，得到重组质粒；

（3）将步骤（2）获得的重组质粒线性化后导入原始毕赤酵母菌中，筛选得到重组毕赤酵母基因工程菌；所述重组毕赤酵母基因工程菌通过游离发酵、固定发酵或固定化连续发酵的方式产木聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在固定发酵和固定化连续发酵中，所述固定化载体为棉纤维织物、无纺布、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、沸石、细菌纤维素膜、丝绸、甘蔗渣和玉米秸秆中的任意一种或几种的组合，固定化载体的用量为2-80 g/L发酵培养基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，产木聚糖酶发酵的发酵培养基中，各组分的浓度为：蛋白胨10-30 g/L、酵母粉5-15 g/L、无氨基酵母氮源10-20 g/L、磷酸氢二钾0.1-1 g/L、磷酸二氢钾1-5 g/L、生物素0.1-5 mg/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在发酵过程中加入甲醇诱导木聚糖酶的表达。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵的温度为28-30℃，发酵的转速为200-300 rpm，发酵的时间为72-120 h。