[发明专利]一种利用桦褐孔菌液体深层发酵杜仲叶提高活性成分产量的方法

权利要求书

1.一种利用桦褐孔菌液体深层发酵杜仲叶提高活性成分产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌种活化：以桦褐孔菌为菌种，接种至斜面菌种培养基上培养，获得活化菌种；

（2）液体菌种培养：将活化菌种转入种子培养基中培养获得液体菌种；28℃下摇床转速150 r/min的条件下摇床培养3天得液体菌种；

（3）杜仲叶粉末制备：将干燥的杜仲叶置于粉碎机中进行粉碎，过筛，得杜仲叶粉末；

（4）液体深层发酵：将液体菌种接种至液体发酵培养基中，28±1℃，摇床转速150±10r/min条件下发酵培养2-6天；所述液体发酵培养基的制备方法为：按照每3 g杜仲叶粉末加100 ml营养盐溶液的配比混合均匀，调节 pH= 6.0， 121±1℃湿热灭菌30min而得；

（5）发酵液去多糖：发酵结束后，通过抽滤得到发酵原液，将发酵原液旋蒸浓缩得浓缩液，然后加入95%乙醇溶液充分搅拌， 4℃静置过夜，离心分离发酵液中的多糖，收集上清液为含活性成分的胞外液；

所述活性成分包括绿原酸、环烯醚萜、黄酮、多酚及酚酸；

所述杜仲叶粉末的大小为≦60目。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述营养盐溶液配方为：玉米粉3.5 g，蛋白胨0.23 g，酵母粉0.12 g，CaCl₂ 0.048 g，CoCl₂•6H₂O 0.002 g，KH₂PO₄ 0.1 g，MgSO₄0.02 g，ZnSO₄•7H₂O 0.001 g，K₂HPO₄•3H₂O 0.05 g，FeSO₄•7H₂O 0.005 g，CuSO₄•5H₂O 0.002g，MnCl₂•4H₂O 0.009 g，用蒸馏水定容至 100 mL，调节pH=6.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述斜面菌种培养基的配方为：麦芽浸膏40 g，蛋白胨4 g，琼脂10 g，用蒸馏水定容到100 ml，pH值为5.4-5.6。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述种子培养基组成为：KH₂PO₄ 0.03 g，MgSO₄ 0.02g，酵母浸膏 0.3 g，蛋白胨0.05 g，葡萄糖1 g，用蒸馏水定容至 100 mL，121±1℃湿热灭菌30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，28±1℃，摇床转速150±10 r/min条件下发酵培养2-4天。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，95%乙醇溶液用量为浓缩液体积的4倍。