[发明专利]一种细胞保存液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种细胞保存液及其制备方法和应用，具体涉及一种间充质干细胞、NK细胞、CART细胞保存液及其制备方法和应用。一种细胞保存液，各组分含量如下：每100ml细胞保存液中，含有人血清白蛋白5‑15ml、复方电解质注射液80‑90ml、不含亚硫酸盐类抗氧化剂的复方氨基酸注射液1‑5ml、L‑谷氨酰胺0.01‑1g、无水葡萄糖0.1‑1g。本发明保存液维持细胞活率不低于80％长达144h及以上，结团率低于12％，极大的延长了细胞制剂的保存时间，可实现全国乃至全球范围内应用的可能性。本发明中应用的所有组分都为临床级药品，临床应用安全可靠。

技术领域

本发明属于细胞保存技术领域，涉及一种细胞保存液及其制备方法和应用，具体涉及一种间充质干细胞、NK细胞、CART细胞、DC细胞、CIK细胞、PBMC、造血干细胞保存液及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，随着干细胞治疗、免疫细胞治疗和基因编辑等基础理论、技术手段和临床医疗探索研究的不断发展，细胞疗法为一些严重及难治性疾病提供了新的治疗思路与方法。细胞疗法是一种将活细胞注射到患者体内以治疗某些疾病的方法。近些年，细胞库的建设和发展，以及由此带来的细胞生产、存储等能力的扩展，增强了全球细胞疗法市场的容量，细胞治疗产品由此受到广泛关注。

活细胞作为细胞治疗产品的主要有效成分，就如何维持细胞的高活率、总细胞浓度、活细胞浓度、低结团率以及如何保证产品的临床安全性是目前细胞临床转化的主要难点。因此，急需研究一种细胞保存液以解决上述问题。

活率、总细胞浓度、活细胞浓度是评价细胞治疗产品有效剂量的三个金标准。这三者的关系可表述为活率＝活细胞浓度/总细胞浓度×100％，当活细胞浓度和总细胞浓度低于质控标准时，活率数据可能依然达标，因此仅活率高这一个指标不足以说明细胞治疗产品剂量有效。而现有细胞治疗产品相关专利皆只展示活率数据，总细胞浓度和活细胞浓度数据未曾体现，因此无法有力说明产品剂量有效。

细胞结团率表示的是细胞的凝集程度，是评价细胞治疗产品安全性的一个重要指标。现有技术常通过加入人血白蛋白的生理盐水作为细胞保存液，在运输过程中，细胞极易结团，静脉输注存在极大的安全隐患。当细胞结团率高时，注入动物体内，常引起肺栓塞、血管栓塞等致命性反应，因此需要对结团率进行严格把控。现有技术常添加肝素以抗团聚，但该类产品不适用于凝血不全患者。

亚硫酸盐作为抗氧化剂常添加到易氧化的成分中，但该类抗氧化剂可引起敏感体质患者发生不良反应,可表现为皮炎、荨麻疹、潮红、低血压、腹痛、腹泻等,严重的可发生危及生命的过敏性休克和哮喘。现有技术相关专利中常添加含该类氧化剂的成分，存在临床应用安全风险。

低温运输既可减缓细胞的代谢速率，又可避免复苏再操作的安全风险，较常温运输和冷冻运输是更为理想的运输方式。但目前尚未见能长时间维持细胞活性的低温保存方法及其相关试剂，能够既无安全隐患又能长时间的维持较高的细胞活率和活细胞浓度，以满足细胞全国甚至全球运输的需要。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的主要目的在于提供一种在低温条件下维持间充质干细胞、NK细胞、CART细胞等细胞在长达5天及以上具有更高细胞活率和活细胞浓度且具备低结团率的在临床上安全可靠的细胞保存液。

本发明的另一目的在于提供上述细胞保存液的制备方法。

本发明的又一目的是提供该细胞保存液的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于制备细胞保存液的组合物,所述的组合物由复方氨基酸注射液、L-谷氨酰胺0.01-1g和无水葡萄糖按照(0.1-5)ml：(0.01-1)g：(0.1-1)g组成。

作为本发明的一种优选，所述的复方氨基酸注射液为不含亚硫酸盐类抗氧化剂的十四复方氨基酸注射液14AA-SF。

本发明所述的组合物在制备细胞保存液中的应用。