[发明专利]一种红霉素诱导启动子及其应用

说明书

本发明公开了一种红霉素诱导启动子及其应用。本发明所提供的特异启动子，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1序列所示。实验证明，本发明提供的特异启动子可以在红霉素诱导时启动目的基因(如绿色荧光蛋白编码基因)的表达，说明该特异启动子是一个红霉素诱导启动子。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红霉素诱导启动子及其应用。

背景技术

启动子是位于结构基因上游的一段DNA序列，具有转录起始特异性，RNA聚合酶能够与其结合并启动基因的转录。原核启动子中-10区(TATA区)和-35区(TTGACA区)是RNA聚合酶与启动子的结合位点。相比组成型启动子，诱导型启动子可通过添加诱导剂或改变培养条件等实现下游目的基因的可控表达，因此它广泛应用于基因工程领域。大肠杆菌具有遗传背景清晰(基因操作简单)、生长周期短，可实现高密度发酵等优点而广泛用做原核表达宿主；同样地，属于肠杆菌科的肺炎克雷伯菌与大肠杆菌遗传背景同源性较高，繁殖速度快，也常被用做原核表达宿主。目前异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、四环素或高温等诱导启动子在原核生物表达目的蛋白中已有广泛应用，各有优缺点。

增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)是绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的一种突变体，由238个氨基酸构成，分子量约为27KDa。EGFP的荧光强度比GFP大6倍以上，具有对宿主细胞毒副作用小以及检测方法简便，无需添加底物等优点，因此，EGFP作为报告基因在生物学研究领域中得到了非常广泛的应用。

发明内容

本发明目的是提供一种红霉素诱导启动子，经NCBI数据库比对和文献调研，该DNA序列虽在鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌等基因组或者质粒均有发现，但是尚未发现和报道该序列是一种红霉素诱导启动子，可以响应红霉素，进而启动表达下游基因。该红霉素诱导启动子可以有效地补充和丰富当前的启动子模块库，具有重要的潜在应用。通过红霉素启动目的基因(以EGFP为例)的表达，证明其可在基因工程领域以肠杆菌科为宿主来表达目的蛋白，也有可能在环保领域用于检测环境介质中红霉素的残留。

本发明的技术方案

一种红霉素诱导启动子，具体为序列表SEQ ID NO.1序列所示的特异DNA分子；本发明同时提供了含有所述特异DNA分子的表达盒。所述表达盒包括由所述特异DNA分子组成的启动子区、转录起始区、目的基因区、转录终止区和任选的翻译终止区。

本发明还提供了含有以上所述的特异DNA分子的重组质粒。所述重组质粒可为将上述特异DNA分子插入出发质粒，得到的重组质粒。所述重组质粒可包括上述特异DNA分子的表达盒。例如，所述重组质粒具体可为实施例提及的重组质粒pUC18-P_EGFP和pUC18T-P_EGFP。

本发明还提供了含有上述特异DNA分子的转基因细胞株。例如，含有上述特异DNA分子的转基因细胞株可为实施例提及的E.coli DH5α/pUC18-P_EGFP和K.pneumoniaeATCC13883/pUC18T-P_EGFP。以上列出的转基因细胞株不具有限制性。本发明可使用任何含有上述特异DNA分子的转基因细胞株。

本发明还提供了上述特异DNA分子、上述表达盒或上述重组质粒在启动目的基因表达中的应用。

本发明所述启动目的基因表达的应用方法，具体可为：

1.上述特异DNA分子作为启动子或红霉素诱导启动子，插入到任何目的基因或增强子的上游来启动目的基因的表达；

2.将目的基因插入上述表达盒中的所述特异DNA分子的下游，由所述特异DNA分子启动目的基因的达；

3.将目的基因插入上述重组质粒中的所述特异DNA分子的下游，由所述特异DNA分子启动目的基因的表达。