[发明专利]公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用在审
| 申请号： | 202110303536.0 | 申请日： | 2021-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN112760413A | 公开（公告）日： | 2021-05-07 |
| 发明（设计）人： | 孙万平;张玲;钱利祥;丁威;方坛芬;韩蓉 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强;陶海锋 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 公共 引物 多重 定量 pcr 检测 技术 转基因 大豆 中的 应用 | ||
1.公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，其特征在于，提取待检测产品基因组DNA作为模板，在嵌合引物与荧光公共引物存在下采用两步退火温度法进行PCR反应，对PCR产物进行GeXP系统检测即完成产品中转基因大豆成分的检测；所述公共引物的序列为SEQ ID NO.1，在其5’端进行荧光染料标记。
2.根据权利要求1所述公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，其特征在于，所述嵌合引物为SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.13。
3.根据权利要求1所述公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，其特征在于，进行PCR反应时，升温程序为95℃预变性 5min；95℃变性30s，62℃退火10s，56℃退火20s，72℃ 延伸30s共10个循环；然后72℃ 预变性2min；95℃变性30s，56℃退火 30s，72℃ 延伸30s，共30个循环；最后72℃延伸7min。
4.根据权利要求1所述公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，其特征在于，进行PCR反应时，采用25微升体系，其中公共引物的终浓度为1600nM，针对转基因大豆的嵌合引物对的终浓度如下：M7SF53.6nM、M7SR 53.6nM、D6SF 52.8nM、D6SR52.8nM、CVSF 24nM、CVSR 24nM、M69SF16nM、M69SR 64nM、M05SR 40nM、M08SF32nM。
5.根据权利要求1所述公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，其特征在于，所述产品为包含大豆成分的食品或者饲料、保健品、药品。
6.嵌合引物与荧光公共引物在多重定量PCR检测产品中转基因大豆成份中的应用；所述公共引物的序列为SEQ ID NO.1，在其5’端进行荧光染料标记。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述嵌合引物为SEQ ID NO.2至SEQ IDNO.13。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，转基因大豆的品种为MON7701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705和MON87708。
9.利用公共引物介导的多重定量PCR检测技术进行产品中转基因大豆成分检测的方法，其特征在于，包括以下步骤，提取待检测产品基因组DNA作为模板，在嵌合引物与荧光公共引物存在下采用两步退火温度法进行PCR反应，对PCR产物进行GeXP系统检测即完成产品中转基因大豆成分的检测。
10.多重定量PCR检测转基因大豆用试剂盒，包括嵌合引物与荧光公共引物；所述公共引物的序列为SEQ ID NO.1，在其5’端进行荧光染料标记；所述嵌合引物为SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.13。
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