[发明专利]一种新型的拉曼光谱检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提出了一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，包括与组织抗原连接的单克隆抗体或多克隆抗体、拉曼活性化合物标记的二抗、拉曼表面增强剂、磷酸缓冲液和抗原修复液。本发明试剂盒引入拉曼表面增强剂，将拉曼活性化合物标记在二抗上，并且将金属纳米粒子或金属氧化物偶联至葡聚糖骨架上，利用抗体和抗原的特异性结合，将金属纳米粒子引入二抗检测系统，在不破坏组织细胞的情况下，增强了拉曼光谱仪的检测信号，同时也提高了检测结果的重复性和准确性，并节省了检测时间，减少了人为判定检测结果的误差。

技术领域

本发明涉及免疫组化技术领域，尤其涉及一种新型的拉曼光谱检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

宫颈癌居于全球女性癌症发病率的第二位，是重要的公共健康问题。全球每年新增宫颈癌病例约50万，有27.3万人死于宫颈癌，其中约85％死亡病例发生在发展中国家，中国每年新增宫颈癌病例约有13.5万，占全球新发病例的1/3，因此中国也是宫颈癌高发国之一。目前，宫颈癌筛查普遍采用的是宫颈病变三阶梯诊断(液基细胞学、阴道镜和组织病理学诊断)联合HPV检测，但早期诊断宫颈癌仍然比较困难，存在取材困难，假阴性高，特异性低等问题。

表面增强拉曼光谱(SERS)技术具有简便、快速、干扰少、无损和成本低的特点，已经在分析化学、检验医学、食品安全和表面科学等领域进行了广泛和深入的研究。现有技术中，人们已经采用纳米SERS探针处理活细胞，进行SERS检测，但活性纳米粒子的导入是一种繁琐、高成本的过程，电穿孔导入纳米材料可能对细胞带来破坏，导致细胞信息的丢失，对细胞的鉴别和检测带来不可控的因素，同时由于生物细胞体系自身的复杂性，而且纳米材料与细胞生物体系的相互作用始终处于动态变化中，使得SERS检测结果的重现性和可靠性都相对较差。因此研究特异性高，同时不会对细胞造成破坏的宫颈癌检测方法尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种不破坏细胞、检测结果重现性和准确性高的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒及其使用方法。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，包括单克隆或多克隆抗体组、拉曼活性物质标记的二抗、拉曼表面增强剂、磷酸缓冲液和抗原修复液。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述单克隆或多克隆抗体组为兔抗人CD3抗体、兔抗人CK20抗体、兔抗人p53抗体、NapsinA抗体、鼠抗人CEA抗体、MUC-4抗体、p16抗体、CK10抗体、CK14抗体、CK17抗体和Bax抗体中的两种或多种组合，所述二抗为拉曼活性化合物标记的Polymer-酶标二抗。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述拉曼活性化合物为2,4-二硝基苯酚、氨基苯甲酸、赤藓红、生物素、地高辛、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素和氨基吖啶中的一种或多种组合。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述拉曼表面增强剂为金属纳米粒子和金属氧化物纳米粒子中的一种或多种组合。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述金属纳米粒子为银纳米粒子、金纳米粒子、铂纳米粒子、锂纳米粒子或铜纳米粒子中的一种或多种组合，粒径为100-200nm。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述金属氧化物为纳米粒子为氧化钛纳米粒子、氧化铁纳米粒子、氧化银纳米粒子、氧化锂纳米粒子、氧化铜纳米粒子、氧化金纳米粒子中的一种或多种组合。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗原修复液为EDTA缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括一种新型的拉曼光谱检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

S1，烤片、脱蜡和复水：将组织切片置于60-65℃的烘箱中60min；将经过烤片后的组织切片置于二甲苯中浸洗2次，每次10分钟，然后依次在无水乙醇、95％乙醇、85％乙醇中分别浸洗2次，每次5分钟；