[发明专利]一株过表达Spt7

权利要求书

1.一株过表达Spt7基因，其特征是：Spt7基因的核酸序列如SEQ ID No .1所示，Spt7基因相应的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，Spt7基因上游的核酸序列如SEQ ID No .3所示，Spt7基因下游的核酸序列如SEQ ID No .4所示，所构载体的启动子PglaA的核酸序列如SEQID No.5所示，筛选所用潮霉素抗性标记基因hyg的核酸序列如SEQ ID No.6所示。

2.权利要求1所述一株过表达Spt7基因的黑曲霉工程菌株，其特征是：该工程菌株成功过表达Spt7基因，命名为：OE:Spt7黑曲霉菌株。

3.权利要求2所述一株过表达Spt7基因的黑曲霉工程菌株的构建方法，其特征在于所选出发菌株为A. niger CGMCC 10142菌株，通过根瘤农杆菌介导的转化法将过表达Spt7基因的质粒随机整合到黑曲霉基因组上进行表达。

4.权利要求3所述的构建方法，其特征是包括：spt7基因过表达载体的构建，即p44-PglaA-spt7，spt7基因敲除载体的构建，即p44-Δspt7，分别将此表达载体借助农杆菌转化法转入黑曲霉种，筛选黑曲霉重组菌株的方法；其中所述黑曲霉重组菌株的工程构建方法包括如下步骤：

(a)PglaA、spt7目的基因、hyg基因、spt7基因上游序列和下游序列的扩增；

(b) 分别将PglaA和spt7目的基因的片段及hyg基因、spt7基因上游序列和下游序列通过Over-lapPCR进行融合，分别获得融合片段PglaA-spt7和Δspt7-hgy；

(c) 对pCAM-BIA-1300质粒进行EcoR I和PstI双酶切线性化处理；

(d) 利用重组酶分别将(b)中片段与（c）中线性化质粒进行连接，构建重组质粒pOE:spt7和pΔspt7；

(e) 通过农杆菌转化法将（d）中的两个重组质粒转化黑曲霉，筛选目的基因整合到基因组的黑曲霉工程菌株和目的基因被敲除的工程菌株。

5.权利要求2所述一株过表达Spt7基因的黑曲霉工程菌株在提高重组黑曲霉菌株柠檬酸产量方面的应用。

6.权利要求2所述一株过表达Spt7基因的黑曲霉工程菌株在减少杂酸生成方面的应用；所述的减少杂酸生成指的是降低草酸的生成量。